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幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是人类感染最常见的病原菌之一,是慢性胃炎、十二指肠消化性溃疡主要病因,与胃和十二指肠部位的疾病密切相关,并诱发胃癌的发生。猴头菌(Hericium erinaceus)是著名的食药两用真菌,主要有抗溃疡、抗炎症、抗肿瘤、抗衰老等作用。其中以猴头菌固体发酵物体为原料制成的猴头菌片单独或作为辅助药物,对慢性胃炎、十二指肠溃疡、十二溃疡性结肠炎、上消化道恶性肿瘤、胃癌等消化性疾病都有良好的疗效。本文是在前人研究的基础上,以活性跟踪手段对猴头菌中抑制H.pylori活性物质进行制备、分离纯化和活性进行研究。本论文研究方面主要分为以下四部分:1.猴头菌抑制H.pylori活性提取物制备新工艺本部分旨在用大孔树脂分离猴头菌固体发酵物中抑制H.pylori活性组分的制备工艺,利用活性跟踪的方法,比较了HPD-100、HPD-400、D101、AB-8四种大吸附树脂对猴头菌发酵菌丝抑制幽门螺旋杆菌的活性成分的吸附和解吸性能,筛选出效果较好的HPD-100分离纯化实验研究。实验表明,HPD-100大孔树脂能够有效的吸附和解吸抑制幽门螺旋杆菌的有效化学成分,并确定了抑制幽门螺旋杆菌的活性物质主要集中在50-95%乙醇洗脱液,活性由分离前的MIC:10000～20000μg/mL提高到MIC:125～250μg/mL,提高了 80倍。2.猴头菌抑菌提取物的分离纯化和抑制H.pylori活性本部分以抑菌活性跟踪的方法,通过猴头菌抑菌提取物皂化反应,再经过有机溶剂萃取分为乙醚、石油醚、氯仿和正丁醇四个部分,再经硅胶层析、凝胶层析、重结晶和核磁共振波谱技术分离纯化和鉴定出6个化合物,并新发现两种新化合物类化合物:HE-1(未命名),其余化合物为 HE-2(4-Chloro-3,5-dimethoxybenzylalcohol)、HE-3(7α,8β,11-Trihydroxydrimane)、HE-5(1-(5-chloro-2-hydroxyphenyl)-3-Methyl-1-butanone)HE-6(4-Chloro-3,5-dimethoxybenzoic acid)、HE-8(3-Acetyl-4-methoylbenzoic acid)。体外抑菌试验显示:HE-1、HE-5和HE-6对幽门螺杆菌H.pylori ATCC43504的最低抑菌浓度 MIC 分别为 50～100μg/mL、31.25～62.5μg/mL 和 125～250μg/mL。3.猴头菌提取物对耐药细菌的抑制作用的研究本部分通过96孔板法对甲硝唑、克拉霉素、左氧氟沙星和四环素测定最低抑菌浓度MIC的方法,鉴定了临床H.pylori菌株HpZL、Hp3和Hp9对甲硝唑具有耐药性,耐药水平均为64μg/mL;HpW2504和Hp W对甲硝唑、克拉霉素和左氧氟沙星都具有多重性耐药,耐药水平分别为128μg/mL、8μg/mL和 16μg/mL。这些耐药性分别由 rdxA和frxA、23S rRNA、gyrA、16S rDNA基因所控制。设计这些基因的引物进行PCR和测序,再通过BioEdit比对的方法,分析了H.pylori耐药性菌株中这些基因的突变位点。利用猴头菌抑菌提取物、HE-1、HE-5和HE-6对耐药性菌株HpW2504和HpW最低抑菌浓度MIC 分别为 250μg/mL、100～200μg/mL、31.25～62.5μg/mL、31.25～62.5μg/mL,发现这些化合物对耐药性菌株是有作用的,这为以后新药开发提供了基础。