植物在复杂的生长环境中会受到食草动物、病原菌以及机械损伤等生物或非生物的侵害,从而造成植物的局部损伤,而植物会对这种损伤产生防御反应,C6绿叶性挥发物的释放就是其中之一的途径[1]。绿叶性挥发物包括6个碳的醇、醛或酯等,是植物间接防御害虫的次级代谢物,具有重要的生物学功能和意义。ADH基因是绿叶性挥发物转化途径中的关键酶,通过乙醇脱氢酶的催化,可将C6醛转化为C6醇,从而进一步产生作用。但是目前茶学领域对于ADH基因生物学功能的研究甚少。课题组先前研究发现,茶树经茶尺蠖取食处理后,乙醇脱氢酶基因（CsADH）表达水平较对照显著升高。本论文在前期工作基础上,挑选出两条CsADH基因,对其进行克隆,功能验证和相关的表达特征研究。主要研究结果如下:1.基于转录组数据信息,从茶树中克隆得到二个CsADH基因的ORF全长,分别命名为CsADH1、CsADH2。进化树分析显示,两个CsADH基因同源性较高。2.将两个基因的重组质粒分别转入大肠杆菌表达菌株BL21中,在最优诱导条件下诱导表达,得到融合蛋白。原核表达结果表明,两个基因的融合蛋白均在破碎后上清液中分布,SDS-PAGE胶显示它们的蛋白分子量均在80kDa左右。随后利用GC-MS进行定性分析得知乙醇脱氢酶具有催化C6醛转化为C6醇的催化活性。3.通过构建融合蛋白表达载体,验证CsADH1和CsADH2的亚细胞定位情况,在拟南芥原生质体中瞬时表达经激光共聚焦成像呈现定位,发现CsADH1和CsADH2均在细胞质中扩散定位。4.qRT-PCR结果表明,CsADH1在茶尺蠖取食后6h表达量上调,为对照的5倍左右,其余时间点均为下调表达;CsADH2与对照相比,所有时间点下均无显著变化;对于茶尺蠖口腔分泌液处理,CsADH1的表达诱导作用不明显,CsADH2相比对照在3h和12h有较明显的上调表达,分别是对照的3.5倍和5倍左右;两个基因对于低温处理分别在6h和12h有显著上调表达。此外,CsADH1在花中的表达量显著高于其他组织,CsADH2在第三叶中最高。5.使用基因抑制的方法在茶树中验证CsADH1和CsADH2的功能并通过qRT-PCR验证,定量结果显示与对照植物相比,在输入AsODN的孵育期间从6到48h检测到CsADH2的转录水平显著降低。由GC-MS检测结果发现处理过的茶叶中顺-3-己烯醇的丰度也显著降低。该结果表明CsADH2可能在茶树中作为C6醇合成酶起作用。