Gdf9、Dnmt1、Zar1、Mater基因在绵羊卵母细胞、卵丘细胞和胚胎中的表达分析

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卵母细胞成熟与质量直接影响着卵母细胞受精及胚胎发育,且卵丘细胞和卵母细胞之间存在着相互作用。本研究运用Real-time PCR技术,以不同时期、不同培养方式的绵羊卵母细胞、卵丘细胞、胚胎为研究对象,检测Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1 mRNA在各细胞组中的表达水平。探讨卵母细胞和早期胚胎发育过程中基因的表达模式,卵丘细胞与卵母细胞互相作用的分子机理以及Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1 mRNA水平变化与卵母细胞质量的相关性。主要研究结果如下:Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1 mRNA表达水平随着卵母细胞成熟和胚胎分裂逐渐降低(P<0.05);Gdf9和Zar1 mRNA从卵母细胞至囊胚都有表达,Dnmt1 mRNA在16-细胞期表达水平降到最低(P<0.05),在囊胚中没有检测到,Mater mRNA则在8-细胞期降到最低(P<0.05);在GV期卵母细胞中Gdf9、Zar1、Mater mRNA相对表达水平最高(P<0.05);Dnmt1 mRNA却是在12 h表达水平达到最高(P<0.05);随着卵母细胞的成熟,各基因都在18-24 h逐渐降低且差异显著(P<0.05);然而在30 h,4个基因的表达水平又显著上升(P<0.05)。4种基因的mRNA在无极体卵母细胞中的表达水平均高于在有极体卵中的表达水平(P<0.05)。检测Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1 mRNA在不同培养方式卵母细胞和卵丘细胞中的表达水平,结果显示:Gdf9、Zar1、Mater mRNA在体外培养的裸卵中的表达水平均低于卵丘-卵母细胞复合体(P<0.05); Gdf9、Zar1、Mater mRNA在未成熟卵母细胞中的表达高于24 h成熟卵母细胞(P<0.05),而在未成熟卵丘细胞中的表达低于成熟培养的卵丘细胞(P<0.05)。综上所述,Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1 mRNA在早期胚胎中表达呈动态变化;Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1 mRNA表达水平在24 h成熟质量差的卵母细胞中的表达水平高于24 h成熟质量好的卵母细胞,可以作为衡量卵母细胞质量的分子指标;Gdf9、Zar1、Mater mRNA表达有差异,提示上述这些基因可能参与了卵丘细胞和卵母细胞之间的互相作用。
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