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目的 为较系统全面地探讨急性白血病耐药相关基因与临床化疗疗效、预后的关系,本文应用半定量和(或)定量逆转录—聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测急性白血病患者多药耐药基因(Multidrug resistance gene-1,mdr-1)、多药耐药相关蛋白基因(Multidrug resistance-associated protein gene,mrp)、肺耐药相关蛋白基因(Lung resistance-related protein gene,1rp)、乳腺癌耐药相关蛋白基因(Breast cancer resistance protein gene,bcrp)、谷胱苷肽S转移酶基因(Glutathione-S-transferases,GSTs)、DNA拓扑异构酶基因(Topoisomerase,Topo)及bcl-2基因表达水平的高低,为判断急性白血病多药耐药(Multidrugresistance,MDR)的发生和预后、克服白血病MDR提供实验依据。 方法 将140例急性白血病(Acute Leukemia,AL)患者按病程分为初治组、完全缓解组和复发组;按治疗效果分为敏感组和耐药组。用半定量RT-PCR法检测急性白血病患者外周血或骨髓中bcrp、mdr-1、mrp、1rp、GSTα、GSTπ、TopoⅠ、TopoⅡα、TopoⅡβ、bcl-2等基因的mRNA表达水平的高低。通过琼脂凝胶电泳法,计算有关基因的相对表达量。还建立实时荧光定量 RTICR(Real timeluorescent quantitative RT-PCR,FQ RT-PCR)检坝 bcrp、mdr-l、p。lrp的精确拷贝数,探讨化疗疗效及预后与耐药相关基因表达之间的关系。 结果(一)通过半定量 RTPCR检测 AL患者上述 10个基因的表达水平,得到如下结果: 1.AL组 bcrp、lrp、GST厂、TOpo 11a、Tope 11日十对表达水平明显高于对照组,GST Q表达水平明显低于对照组(P<0刀引。 2.AL复发组bcrp、md,刁表达水平Hg显高于初治组,差别具有显著性( <0刀1)。 3.AL耐药组mdr叫表达水平明显高于敏感组 巾<0刀引。 4.耐药组bcrp、mdr刁、mrp表达阳性率明显高于敏感组(P<0刀引。 5.bcrp、mdr叫、mrp、lrp基因同时阳性的思者CR率明显低于1~3个基因阳性的患者 中刃刀1人 6.经等级柏关分析显示 mdr! GST。与耐药性呈显著正相关,GST。和 TopollQ与耐药性呈显著负相关(P<0*引。 7.经多因素逻辑回归分析示ndr刁与预后不良呈显著正相关。 8.经直线相关分析,bcrp与mdr八 mdrl与lrp、mdrJ与GSTa、mrp与 lrp呈显著正相关,P<0刀5。m甲与 GST。呈显著负相关,P<0刀1。 (二)为了更准确测定 bcrp、mdr刁、mrp、冲基因的拷贝数,我们建立了 FQ RTPCR方法,制备了标准曲线,结果显示: 3 1.AL组krp基因拷贝数明显高于对照组0叼.05人 2.从复发组mdrl拷贝数明显高于初治组0<0刀引。 3.AL耐药组 mdrl拷贝数明显高于敏感组o<0刀5入 4,经直线相关分析显示mdrq与帅、mdrl与冲、p与一呈显著正相关。 5.经等级相关分祈示mdr刁和冲的表达与耐药性密切相关。 结论 通过本研究结果得出如下结论:l.急性白血病多药耐药的发生涉及的机制较多,与bcrp、mdr刁 mrp及lrp基因中一项或几项异常表达有关,bcrp、mdr刁、m叩及lrp均可作为判断临床多药耐药的指标。2.GSTS和 TopO在酶介导耐药机制中的具体作用需结合其它因素综合分祈,不能将其孤立地作为判断耐药的肯定指标。3.多基因联合运用预测临床MDR效果优于单一基因的预测,白血病多药耐药的发生是多种基因共同作用的结果。但仅从上还有关基因的检测仍不能完全解释临床发主耐药的情况,可能存在其他未知的新的耐药机制。