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脑卒中是神经系统的常见病和多发病，具有高发病率、高死亡率以及高致残率的特点，给家庭和社会带来沉重负担。因此，脑梗塞的有效防治已成为临床急需解决的问题之一。针刺用于治疗脑血管疾病在我国已经延续了几千年，无论是在临床还是在基础研究中，均已证实针刺对脑梗塞所致的缺血性脑损伤有明显的保护作用。但是其具体机制仍然不明确，阻碍了针刺在脑缺血中的进一步应用。课题组前期研究表明电针预处理大鼠百会穴可以诱导局灶性脑缺血再灌注大鼠的缺血耐受。目前研究认为电针诱导的脑缺血耐受的机制多样，其中信号通路在此起到了重要的作用，如ERK，NOTCH等。Wnt/β-catenin信号通路作为一条多环节、多作用位点的开放通路，在神经系统中扮演着非常重要的角色，其组成成分在成人大脑的大多数区域表达。已有文献表明Wnt/β-catenin信号通路参与了心肌梗死，以及脑缺血损伤的发展过程。然而，Wnt/β-catenin在电针诱导的脑缺血耐受过程中的作用尚未见报道。本实验通过建立SD大鼠的脑缺血再灌注损伤(MCAO)的模型，探讨Wnt/β-catenin在电针诱导的脑缺血耐受过程中的作用。 实验Ⅰ 目的:证实EA预处理对I/R损伤产生的保护效应及明确EA预处理对β-catenin的调节作用。 方法:雄性SD大鼠随机分为5组:Control组，sham组，MCAO组，SEA组和EA组。MCAO组大鼠通过线栓法建立大脑中动脉栓塞模型;sham组大鼠手术操作方式同MCAO组，但仅分离血管不阻断动脉;SEA组大鼠仅以针刺进行预处理不通电;EA组大鼠接受电针预处理30min，电针结束后2h建立MCAO模型。通过Nissl染色法观察海马CA1区锥体层存活神经元细胞数(n=6-8)。Western blot(n=10)及免疫组化法(n=6-8)分析β-catenin蛋白的表达。 结果:再灌注24h后，EA预处理组海马CA1区存活神经元细胞数较MCAO组显著增多(P＜0.05)，EA组与Control组相比，EA组β-catenin表达水平显著增多(P＜0.05)。 结论:电针预处理能够产生保护效应对抗脑缺血再灌注损伤同时上调β-catenin表达水平。 实验Ⅱ 目的:评估Wnt/β-catenin抑制剂Dkk-1对EA预处理诱导产生保护效应的影响。 方法:将实验动物随机分组为sham，MCAO，EA+MCAO，Dkk-1+MCAO，EA+Dkk-1+MCAO和EA+PBS+MCAO组。sham组，MCAO组及EA+MCAO组大鼠处理方式同实验一。Dkk-1+MCAO组大鼠于缺血前30min颅内注射Dkk-1; EA+Dkk-1+MCAO组大鼠电针预处理30min，后缺血前30min颅内注射Dkk-1; EA+PBS+MCAO组大鼠以相同剂量PBS进行颅内注射。再灌注24h后，评估其神经行为学评分，Westernblot分析β-catenin和Bcl-2/Bax比率的改变(n=10)。Nissl染色法及免疫荧光法评估海马CA1区锥体层存活神经元细胞数(n=6-8)。 结果:EA+Dkk-1+MCAO组与EA+MCAO组相比，神经行为学评分显著降低(P＜0.05)，β-catenin表达水平及Bcl-2/Bax比值显著下降(P＜0.05)。 结论:Dkk-1逆转了EA预处理产生的保护效应。 实验Ⅲ 目的:评估EA预处理对I/R损伤后认知功能恢复的影响。 方法:将大鼠随机分为sham，MCAO，EA+MCAO，Dkk-1+MCAO，EA+Dkk-1+MCAO和EA+PBS+MCAO组(n=12)。各实验组处理方式同上。使用Morris水迷宫测试对学习和记忆能力进行评估。 结果:EA+MCAO组与MCAO组相比逃避潜伏期显著缩短(P＜0.05)，靶象限游泳时间显著延长(P＜0.05)。EA+Dkk-1+MCAO组与EA+MCAO组相比，逃避潜伏期延长(P＜0.05)，靶象限游泳时间减少（P＜0.05）。 结论:EA预处理能够改善I/R对认知功能产生的损伤而Dkk-1逆转了EA保护效应。 实验Ⅳ 目的:评估Wnt/β-catenin激动剂LiCl是否能够模拟出EA预处理带来的保护效应。 方法:将实验动物随机分组为sham，MCAO，EA+MCAO，LiCl+MCAO和NS+MCAO组(n=10)。Sham组，MCAO组和EA+MCAO组大鼠实验处理方式同上。LiCl+MCAO组大鼠于缺血前腹腔内注射LiCl剂量为1mEq/kg每12h，连续7天，NS+MCAO组大鼠则在腹腔内注射相同剂量的生理盐水。再灌注24h后，westernblot分析Bcl-2/Bax比率及β-catenin的变化。 结果:LiCl+MCAO组与MCAO组相比，Bcl-2/Bax比值及β-catenin表达水平显著升高(P＜0.05)而LiCl+MCAO组与EA+MCAO组之间差异无统计学意义。 结论:LiCl能够模拟EA预处理产生的保护效应。 小结: 1、电针预处理能够产生保护效应对抗脑缺血再灌注损伤同时上调β-catenin表达水平。 2、Wnt/β-catenin抑制剂Dkk-1逆转了EA预处理产生的保护效应。 3、EA预处理能够改善I/R对认知功能的损伤。 4、LiCl能够模拟EA预处理产生的保护效应。 结论:Wnt/β-catenin参与了电针预处理诱导的脑缺血耐受效应。