DNA网络用于免疫细胞捕获和原位免疫治疗的研究

来源 :朱晨旭 | 被引量 : 0次 | 上传用户:samsam1005
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DNA作为一种具有序列可编辑性、结构可设计性以及良好的生物相容性的功能性高分子,近年来得到了广泛关注。目前,DNA材料已经在细胞捕获、免疫治疗、细胞递送等领域展现出巨大的潜力。本论文基于滚环扩增技术(Rolling circle amplificatipn,RCA),设计合成了DNA网络,并对DNA网络对T淋巴细胞高度特异性的高效捕获和修饰功能以及材料体系在免疫治疗方面的应用进行了探究,主要研究内容概括如下:1、对DNA网络进行了序列设计,合成以及表征。合成了DNA环状模板并在phi29 DNA聚合酶的作用下发生RCA反应,制备了具有特异性捕获和免疫检查点封锁T淋巴细胞功能的DNA链1和含有免疫刺激性Cp G寡核苷酸(Cp G oligonucleotide,Cp G ODN)的DNA链2。两条DNA链上设计了能互补杂交形成DNA网络的位点,互补位点同时为限制性核酸酶Hha I的切割位点。此外,合成并表征了具有炎症响应性的纳米颗粒Hha I@TGMS。2、使用上述DNA网络分别从人工混合细胞群以及消化后的肿瘤组织细胞群中快速高效捕获T淋巴细胞。荧光共定位实验证明核酸适配体与T淋巴细胞膜特异性结合。荧光显微镜成像以及细胞计数证实从人工混合细胞群捕获T淋巴细胞的高效性,流式细胞术证明对肿瘤浸润T淋巴细胞(Tumor-infiltrating T lymphocytes,TIT)的高效捕获。3、探究捕获TIT的DNA网络在免疫治疗中的应用。通过细胞实验验证酶切后的DNA网络对巨噬细胞的激活作用,利用无标记实时细胞分析技术以及荧光成像验证捕获的TIT对黑色素瘤细胞的杀伤效果。小鼠原位黑色素瘤模型验证捕获了TIT并负载有Hha I@TGMS纳米颗粒的DNA网络的免疫疗效。本研究中利用DNA网络高效捕获分离T淋巴细胞推动了利用DNA材料进行细胞分离领域研究的进一步发展,同时为DNA材料在免疫治疗中的应用提供了新思路。
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