【摘 要】
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肿瘤的发展与转移与肿瘤微环境（Tumor microenvironment,TME）密切相关,因此,研究肿瘤细胞与其微环境的相互作用具有极其重要的意义。PUP-IT邻近标记系统是将蛋白酶体辅助因子A（Proteasome accessory factor A,Paf A）与诱饵蛋白进行融合,利用Paf A的催化功能将脱氨后的原核类泛素蛋白（Prokaryotic ubiquitin-like pr
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肿瘤的发展与转移与肿瘤微环境（Tumor microenvironment,TME）密切相关,因此,研究肿瘤细胞与其微环境的相互作用具有极其重要的意义。PUP-IT邻近标记系统是将蛋白酶体辅助因子A（Proteasome accessory factor A,Paf A）与诱饵蛋白进行融合,利用Paf A的催化功能将脱氨后的原核类泛素蛋白（Prokaryotic ubiquitin-like protein,Pup）连接到诱饵及其附近蛋白的赖氨酸上,可以标记与诱饵蛋白相互作用的猎物蛋白。基于PUP-IT邻近标记系统,我们设计了一种能够研究细胞间相互作用的邻近传感器,表达该邻近传感器的细胞通过Paf A能够将脱氨后的Pup（E）标记到与之邻近的细胞上。检测发现,我们设计的邻近传感器具有较好的自我标记和邻近标记功能。我们设计的这种邻近传感器将为今后开展肿瘤细胞及其微环境相互作用的研究提供一个有力的工具。蛋白质之间的相互作用在生命活动中起着重要作用。如何高通量地研究与鉴别蛋白质之间的相互作用,在技术上和理论上都具有十分重要的意义。目前,已经有许多种研究蛋白质相互作用的方法,其各具优势,但也都有自身的局限性。我们将猎物蛋白和诱饵蛋白分别与泛素的N端部分和C端部分相连,当两种蛋白发生相互作用时,泛素的N端部分和C端部分将会重组形成完整泛素,Cre重组酶被释放后进入细胞核介导重组反应。基于此,我们分别设计了能够在胞内或胞外识别蛋白质相互作用的邻近传感器。经过初步探究,胞内邻近传感器和胞外邻近传感器均未能有效检测到已知蛋白质之间的相互作用。后续我们还需要进一步改进邻近传感器,以真正实现对蛋白互作的识别。
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