【摘 要】
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铜绿假单胞菌是常见的革兰氏阴性细菌,是人类、动物和植物的机会性病原体,由于铜绿假单胞菌对于抗生素的天然抗性,治疗铜绿假单胞菌病原体引起的疾病往往非常困难。铜绿假单胞菌的化学传感系统和双组份转导系统是铜绿假单胞菌感染、侵入宿主以及感知外界的环境变化,调节自身基因表达,控制菌体的行为、代谢以及发育等所必需的。化学传感系统中的甲基趋化蛋白受体以及双组份转导系统中的组氨酸激酶在检测环境信号中发挥着重要的作
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铜绿假单胞菌是常见的革兰氏阴性细菌,是人类、动物和植物的机会性病原体,由于铜绿假单胞菌对于抗生素的天然抗性,治疗铜绿假单胞菌病原体引起的疾病往往非常困难。铜绿假单胞菌的化学传感系统和双组份转导系统是铜绿假单胞菌感染、侵入宿主以及感知外界的环境变化,调节自身基因表达,控制菌体的行为、代谢以及发育等所必需的。化学传感系统中的甲基趋化蛋白受体以及双组份转导系统中的组氨酸激酶在检测环境信号中发挥着重要的作用。在本研究中我们主要以铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的原始菌株PAO1为模型,分析在甲基趋化蛋白受体以及组氨酸激酶中同时存在的CHASE结构域的功能。在PA2072 chase4蛋白纯化过程中发现蛋白存在单体和二聚体两种状态,但是PA2072 chase4蛋白中不存在半胱氨酸,因此猜测二聚体蛋白不是由两个单体蛋白通过二硫键形成二聚体,而是可能存在某种小分子与单体蛋白相互作用,促使二聚体蛋白形成。根据有关文献报道,我们主要测试PA2072 chase4单体蛋白与氨基酸、金属离子以及核酸小分子等是否具有相互作用。在本研究中主要采用等温滴定量热仪、动态光散射仪及核磁共振波谱法检测PA2072 chase4单体蛋白与各分子间的相互作用。在整个研究过程中发现将Ca2+、Cu2+、Mg2+等金属离子与PA2072 chase4单体蛋白在不同比例下进行滴定时,几乎无热量变化,因此PA2072 chase4单体蛋白与Ca2+、Cu2+、Mg2+金属离子无明显相互作用。亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸等十三种氨基酸与PA2072 chase4单体蛋白在不同比例下进行滴定时同样无明显热量变化。在检测PA2072 chase4单体蛋白与ATP、GTP、UTP、CTP、AMP及ADP的相互作用时发现,将ATP与PA2072chase4单体蛋白在不同比例下进行滴定,有明显热量变化;在PA2072 chase4单体蛋白与ATP混合后测得的粒径为2.7 nm,相较于PA2072 chase4单体蛋白2.7nm的粒径无明显变大;利用核磁滴定的方法检测PA2072 chase4单体蛋白与ATP之间是否存在相互作用,发现在ATP滴定15N PA2072 chase4单体蛋白后有氨基酸发生位移。根据以上结果可知PA2072 chase4单体蛋白与ATP具有相互作用,但目前还不清楚ATP与PA2072 chase4单体蛋白间相互作用的机制,还需后续实验进一步验证。
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