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鸡白细胞介素2是由 T 淋巴细胞产生的一类细胞因子，能激活 T 细胞，促进B细胞分化及分泌抗体，增强单核细胞以及 NK 细胞的杀伤活性，在机体的免疫反应中具有重要的作用，是一类天然的免疫增强剂。本课题对鸡白细胞介素2(IL-2)原核表达、真核表达及其增强传染性法氏囊病病毒(IBDV)DNA疫苗免疫效果进行了研究。 将萧山鸡白细胞介素2基因克隆入原核表达载体pET-28b，获得了重组表达载体pET-28b-IL-2，将此重组表达质粒转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导表达鸡IL-2。重组质粒的酶切、PCR鉴定、SDS-PAGE以及MTT法活性检测试验证实萧山鸡IL-2在大肠杆菌中得到了正确、高效的表达。用萧山鸡IL-2所制备的多克隆抗体，进行ELISA和Western blotting试验表明所表达的萧山鸡IL—2具有良好的免疫原性及免疫反应性。 将萧山鸡白细胞介素2基因克隆入真核表达载体pCI的CMV启动子的下游，构建真核表达质粒pCI-IL-2。高压电击法将重组质粒转化入dam和phoP基因双突变的减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111株(ZJ111／pCI-IL-2)，并直接转染Vero细胞，提取细胞总DNA，DIG标记探针可检测到阳性杂交信号。用FITC标记的羊抗兔IgG进行间接免疫荧光试验，可检测到特异性黄绿色荧光。SDS-PAGE和Western blot可检测到18.5KD和14.5KD的蛋白条带。结果表明减毒沙门氏菌zJ111能将重组质粒pCI-IL-2携带进入Vero细胞内表达具有免疫反应性的鸡IL-2。 减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111／pCI-IL-2和ZJ111／pCI菌株安全性试验，结果表明：ZJ111／pCI-IL-2和zJ111／pCI菌株只有在10~9cfu高剂量口服后引起少数试验小鼠(2／15)的死亡，10~7cfu和10~8cfu口服剂量组的试验小鼠均安全，将zJ111／pCI-IL-2以10~9cfu的剂量接种14日龄的非免疫鸡，未见任何不良反应，也不影响鸡只的增重，脾脏、肝脏中的沙门氏菌二次免疫后3周已被鸡的免疫系统所清除，粪便中的沙门氏菌也逐渐减少。表明利用减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111菌株作为载体传递质粒DNA具有良好的安全性。PCR鉴定和酶切鉴定表明ZJ111／pCI-IL-2菌株在体内外均具有良好的稳定性。 将ZJ111／pCI-IL-2菌株分别以10~7cfu、1O~8cfu、10~9cfu不同的剂量口服与200μg pCI-VP2／VP4／VP3质粒联合接种14日龄的非免疫鸡，2周后进行二免，浙江大学硕士学位论文二免后17天攻击工BDv强毒BC6/85。动物攻毒保护试验结果表明:ZJI 11/pCI扛L一2菌株与pC工一vPZ/vP4/vP3质粒联合免疫能显著增强IBDv多聚蛋白DNA疫苗对强毒攻击的保护。其中zjz rl/pel一IL一2菌株10月efu、10，efu的剂量与200卜gpCI一VpZ/Vp4/Vp3联合免疫组的保护率均为81%，ZJI 11/pCI一IL一2菌株10丁efu与200林9 pCI一VpZ/Vp4/Vp3联合免疫组的保护率(75%)，均高于200林9 pCI一VpZ/VP4/VP3免疫的保护率62.5%。表明每只鸡口服10gefu ZJlll/pCI一儿一2菌是对IBDV多聚蛋白DNA疫苗发挥免疫增强作用的最佳剂量。而且工BDV多聚蛋白DNA疫苗诱导抗体的动态曲线和鸡胸腺、脾脏T淋巴细胞及法氏囊B淋巴细胞增殖反应均得到了一致的结果。此外试验结果表明以减毒沙门氏菌ZJin菌株为载体的鸡IL一2基因免疫增强剂的免疫增强效果明显高于裸质粒IL一2基因免疫增强剂。 本研究对萧山鸡工L一2基因成功地进行了原核表达及真核表达，制备了多克隆抗体。在国内外首次研制了以减毒沙门氏菌为载体的萧山鸡工L一2基因免疫增强剂，所制备的免疫增强剂与IBDV多聚蛋白DNA疫苗联合应用能显著提高DNA疫苗的免疫效果。以减毒沙门氏菌为载体制备萧山鸡工L一2基因免疫增强剂具有省时、方便、价廉、易于群体免疫等优点，为研制低成本、实用化禽类DNA疫苗天然免疫增强剂的提供了一条新途径。