犬蠕形螨病病理组织学观察及诊断抗原的制备

来源 :中国人民解放军军需大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:wacolt
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通过对三例重症犬蠕形螨病犬进行剖检,采取腮腺淋巴结、下颌淋巴结、腋淋巴结、颈浅淋巴结、腋副淋巴结、腘淋巴结、腹股沟浅淋巴结、胸淋巴结、咽后淋巴结、支气管淋巴结、肾淋巴结、胃淋巴结、肝淋巴结、肺脏、肝脏、肾脏、脾脏、心脏和皮肤等分别用5%NaOH消化法和病理组织切片法进行检查。结果发现除了支气管淋巴结、肾淋巴结、胃淋巴结和肝淋巴结均未发现虫体外,其它淋巴结均可见到蠕形螨各期虫体和虫卵。各部淋巴结均呈现不同程度的增生性淋巴结炎、出血性淋巴结炎和卡他性淋巴结炎,首次发现虫体寄生于淋巴结输入淋巴管和皮质淋巴窦内,而髓质没有发现虫体。用5%NaOH消化法在肺脏和肝脏中也发现少量各期虫体及虫卵,而脾脏、肾脏和心脏内血块中未见有虫体和虫卵。通过病理组织切片法在各内脏器官均未发现虫体和虫卵。皮肤病变主要发生于毛囊和真皮,表现为表皮角化、毛囊扩张,可见到虫体切面,破坏的毛囊周围组织可见以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润病变,严重时毛囊壁发生破裂,虫体大量进入真皮,真皮毛细血管扩张、充血,周围发生水肿,并有程度不同的炎性细胞浸润和结缔组织增生。分别对皮肤虫体和淋巴结内虫体进行测量,淋巴结内:成虫平均为216.5μm×40.7μm;若虫平均为154.7μm×35.5μm;虫卵平均为81.3μm×33.2μm;皮肤内:成虫平均为263.2μm×45.5μm;若虫平均为169.4μm×38.1μm;虫卵平均为83.1μm×33.2μm。经过t检验,结果发现淋巴结内成虫明显比皮肤内的小(P<0.01,差异非常显著)。而若虫大小及虫卵大小则差异不明显(P>0.05)。 刮取重症病犬发病部位的皮屑,用5%NaOH消化2h后进行虫体纯化,将纯化的虫体冻融、研磨、超声破碎,经8000r/min离心20min,取上清为蠕形螨盐可溶性粗抗原;将沉渣用尿素混匀,再次超声,经8000r/min离心20min,取上清为蠕形螨尿素可溶性粗抗原。所得抗原用Bradford法进行蛋白浓度检测,浓度分别为1.4mg/ml和1.1mg/ml。经过葡聚糖凝胶层析(G-100),分别得到两个层析峰。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,盐可溶性粗抗原显示两条主蛋白带,分子量约为45.7KDa和27.5KDa;尿素可溶性粗抗原显示两条主蛋白带,分子量约为46.8KDa和 27.SKDa,用正常犬皮处理的对照抗原却出现至少9条蛋白带,分子量范围为:27 KDS~--l 10KD:。将抗原稀释至1:300,血清按1:300稀释,酶标SPA葡萄球菌A蛋白)作为二抗,通过ELISA检测,尿素可溶性粗抗原层析峰第一峰具有较好抗原性,实际检测12例临床检查发现蠕形螨的临床病犬和19例未发现蠕形螨的临床健康犬,阳性符合率和阴性符合率分别为 gi石7%和 78.95%。经与其他皮肤病犬进行检测发现该抗原能较好地与其他皮肤病进行鉴别,与猪蠕形螨阳性血清有一定的交叉反应。由此获得了敏感性和特异性较高的犬蠕形螨病诊断抗原。
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