芳香植物抗菌精油筛选及其杀菌成分分离鉴定

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化学农药对农业生产作出了巨大的贡献,但由于化学农药本身的特点及不合理使用,产生了诸多的环境及社会问题,直接危及社会安宁和和谐发展。同时,随着环境保护与绿色农业发展战略对无公害食品的呼声日益高涨,在今后相当长一段时间内,生物农药将成为今后农药发展的一个重要方向。为人类和生态环境安全提供保障的植物源农药的研发则受到农药科研者的关注,本文测试了12种植物精油对植物病原真菌的抑菌活性,选取肉桂、天竺葵、薄荷精油,对其活性成分进行分离纯化和结构鉴定。1.本研究利用水蒸汽蒸馏法提取芳香植物精油,选取茄镰孢菌(Fusariumsolani)、瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)、禾谷镰孢菌(Fusariumgraminearum)、终极腐霉(Pythium μltimum)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、尖镰孢菌(Fusarium oxysporium)6种植物病原真菌为供试菌株,采用菌丝生长法测定了12种芳香植物精油对6种植物病原真菌的抑菌活性。测试结果表明:香茅油、肉桂油、天竺葵油、月桂油、茶树油和薄荷油对6种病原真菌的抑制率高达100%;其中,肉桂、天竺葵和薄荷精油对灰葡萄孢(B. cinerea)的EC50值都在40μg/mL以下,分别为29.05μg/mL、34.02μg/mL和38.03μg/mL,对禾谷镰孢菌(F. graminearum)的EC50值分别为42.96μg/mL、68.48μg/mL和41.10μg/mL。肉桂,天竺葵和薄荷精油对灰葡萄孢孢子萌发的抑制率也均在90%左右,对孢子萌发具有很好的抑制作用,从另一个角度验证了它们的抑菌活性。2.在活性追踪指导下,应用薄层层析和硅胶柱层析对肉桂、天竺葵和薄荷精油的抑菌活性物质进行分离纯化,得到编号为PCa、MCb和CBb三种抑菌活性成分。PCa对F. graminearum和B. cinerea的EC50分别为83.30μg/mL和52.12μg/mL。MCb对F. graminearum和B. cinerea的EC50分别为172.24μg/mL和52.23μg/mL。CBb对F. graminearum和B. cinerea的EC50分别为41.6μg/mL和45.67μg/mL。应用1H-NMR有机波谱方法并与文献数据比对,确定PCa为香茅醇(citronellol),MCb为薄荷醇(menthol),CBb为肉桂醛(Cinnamaldehyde)。3.镜检发现,肉桂醛和香茅醇能引起灰葡萄孢菌丝形态的畸形、原生质凝结和内含物外溢等现象。经肉桂醛、香茅醇和薄荷醇处理后,灰葡萄孢菌丝细胞膜透性明显增加,菌体葡萄糖含量,可溶性蛋白含量、NADH氧化酶和几丁质水解酶活性均发生明显变化。
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