Mx蛋白是GTP酶发动蛋白超家族成员,是干扰素诱导产生的关键抗病毒蛋白。Mx蛋白能抑制许多病毒的复制,包括单链RNA病毒、双链RNA病毒以及反转录病毒复制周期的早期阶段。Mx蛋白有细胞核和细胞浆两种形式,啮齿类Mx1蛋白在胞核积聚,人的MxA、啮齿类的Mx2和猪的Mx1蛋白定位于胞浆。胞核内的Mx蛋白对甲型流感病毒等细胞核内复制的病毒具有抑制作用,而胞浆内的Mx蛋白能抑制水泡性口炎病毒、布亚病毒等胞浆内复制病毒的增殖。猪Mx蛋白分为Mx1(76KD)和Mx2(73KD),前者具有抗病毒活性,后者的抗病毒活性未见报道。本研究从经IFN-α处理的猪外周血单个核细胞提取总RNA,根据已发表序列设计引物,用RT-PCR扩增得猪Mx1 cDNA。序列测定结果显示,与已发表的猪Mx1 mRNA的核苷酸序列同源性为99.5%,氨基酸序列同源性为98.9%。将猪Mx1 cDNA克隆入真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+),构建重组表达载体pcDNA-Mx1。将猪Mx1 cDNA克隆入Bac-to-Bac?杆状病毒表达系统的pFastBac1载体,用含杆状病毒穿梭质粒Bacmid和辅助质粒转座工程菌DH10Bac,获得重组穿梭载体rBacmid-Mx1,将其DNA转染Sf9昆虫细胞,获得了重组杆状病毒rBac-Mx1,并经免疫荧光试验证明能在昆虫细胞中正确表达猪Mx1蛋白。分别用重组质粒pcDNA-Mx1转染和重组蛋白处理狗肾MDCK细胞系,然后用水泡性口炎病毒感染,通过空斑形成减少试验证明表达的Mx1蛋白具有抗病毒活性,为Mx蛋白生物学功能的进一步研究和应用奠定了基础。