目的:通过MCF-10A(人正常乳腺增生细胞系),对火炭母醇提物的五个萃取部位进行活性筛选,确定火炭母治疗乳腺增生的活性部位;随后采用植物化学分离手段对活性部位进行分离纯化,以期获得单体化合物;并运用细胞模型对其进行活性研究。方法:1.火炭母醇提物及五个萃取部位的制备取火炭母干燥全草,采用95%乙醇加热回流提取,将得到的提取液进行浓缩得浸膏,加入硅胶拌样,分别用不同极性的有机溶剂石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇进行洗脱,浓缩挥干各洗脱液。2.火炭母治疗乳腺增生活性部位的筛选通过MTT实验检测火炭母醇提物的五个萃取部位对MCF-10A(人正常乳腺增生细胞系)细胞增殖的影响。3.火炭母治疗乳腺增生活性部位的分离纯化及结构鉴定采用硅胶柱色谱、ODS反相色谱柱、Sephadex LH-20凝胶柱、MCI小孔吸附树脂、LC-3000型中压制备等色谱技术对活性部位进行分离纯化,获得相应的单体成分,通过化合物的理化性质、HPLC分析及MS、NMR等波谱技术鉴定分离得到的单体化合物。4.火炭母治疗乳腺增生活性部位中分离的5,4’-二羟基-6,7,3’-三甲氧基黄酮、芹菜素对MCF-10A细胞增殖的影响将单体化合物对乳腺增生细胞MCF-10A进行体外活性研究,MTT法检测单体化合物对细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR检测细胞中的c Myc、cyclin D1、ERα的m RNA表达水平。结果:1.通过MCF-10A(人正常乳腺增生细胞系)对火炭母醇提物的五个萃取部位进行治疗乳腺增生的活性筛选发现火炭母乙酸乙酯、丙酮部位对MCF-10A细胞具有明显的抑制作用,并呈现浓度依赖和时间依赖的趋势。2.从火炭母乙酸乙酯部位和丙酮部位分离得到19个化合物,经氢谱、碳谱、质谱等分析鉴定出其中14个化合物,包括4个黄酮类化合物:槲皮素(pce-1)、5,4’-二羟基-6,7,3’-三甲氧基黄酮(pce-8)、木犀草素(pce-15)、芹菜素(pce-16);1个香豆素类化合物:异秦皮素(pce-12);4个有机酸类化合物:邻二苯甲酸(pce-2)、软脂酸(pce-3)、3,4-二羟基苯甲酸(pce-7)、油酸(pce-11);5个酚酸类化合物:没食子酸甲酯(pce-5)、没食子酸(pce-13)、咖啡酸(pce-14)、柯里拉京(pce-17)、3-O-甲基鞣花酸-4’-鼠李糖苷(pce-19)。其中,pce-2、pce-3、pce-8、pce-12、pce-17、pce-19均为首次从该植物中分离得到。3.从火炭母治疗乳腺增生的活性部位分离得到的5,4’-二羟基-6,7,3’-三甲氧基黄酮、芹菜素可以下调MCF-10A细胞中c Myc、cyclin D1、ERα的m RNA表达水平(P<0.01,P<0.05)。结论:1.火炭母乙酸乙酯部位和丙酮部位均能对MCF-10A细胞具有明显的抑制作用,并呈现浓度依赖和时间依赖的趋势。2.从火炭母乙酸乙酯部位分离得到12个化合物,分别为槲皮素、邻二苯甲酸、软脂酸、没食子酸甲酯、3,4-二羟基苯甲酸、5,4’-二羟基-6,7,3’-三甲氧基黄酮、油酸、异秦皮素、没食子酸、咖啡酸、芹菜素、柯里拉京;从火炭母丙酮部位分离得到2个化合物,分别为木犀草素、3-O-甲基鞣花酸-4’-鼠李糖苷。3.火炭母治疗乳腺增生的活性部位分离得到的单体化合物5,4’-二羟基-6,7,3’-三甲氧基黄酮、芹菜素可以下调MCF-10A细胞中cmyc、cyclin D1、、ERα的m RNA表达水平。