论文部分内容阅读
目的：构建由MMP2/9敏感短肽串联多个FOXP3抑制短肽构成的融合蛋白，利用MMP2/9在恶性肿瘤中特异性高表达，使融合蛋白在肿瘤部位被剪切释放出FOXP3抑制短肽而发挥作用，实现靶向、高效的肿瘤治疗。 方法：通过构建质粒、IPTG诱导、镍柱亲和层析和透析复性，我们纯化出融合蛋白6(P60-MMPs)。该融合蛋白是MMP2/9敏感短肽串联六段FOXP3抑制短肽-P60形成的全新蛋白分子。其中的MMP2/9敏感短肽为MMP2/9底物，能够被MMP2/9切开。我们采用胶原酶剪切实验验证融合蛋白能否被MMP2/9剪切；利用FOXP3-EGFP过表达的293T细胞，观察融合蛋白剪切产物对FOXP3核转位的影响。同时，使用融合蛋白6(P60-MMPs)和短肽P60治疗小鼠乳腺癌，观察融合蛋白在小鼠乳腺癌中的疗效，并通过流式细胞术分析小鼠不同组织中免疫细胞的改变，初步研究融合蛋白的抗肿瘤机制。 结果：我们通过原核表达的方式纯化出融合蛋白6(P60-MMPs)。在体外，6(P60-MMPs)能够被MMP2/9剪切为小短肽，其剪切产物能够抑制FOXP3的核转位。在荷瘤小鼠中，6(P60-MMPs)治疗组小鼠乳腺癌体积缩小，肺转移数目减少。通过流式细胞术分析发现，融合蛋白能够下调肿瘤浸润的效应Treg细胞，上调CD8+T细胞。 结论：融合蛋白6(P60-MMPs)能够抑制肿瘤浸润Treg细胞，增加CD8+T细胞的比例，增强机体抗肿瘤免疫，从而抑制小鼠乳腺癌的发展与转移，是比短肽P60更有效的肿瘤治疗方式。