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1970年，Brestcher和Cohn首先提出并证实T细胞活化的双信号学说。当T细胞通过其抗原受体和CD3复合体识别抗原递呈细胞表达的MHC-抗原复合物并与之发生特异性结合后，获得T细胞活化所需的抗原特异性信号(第一信号)。而T细胞还必须获得其与APC表面的多对膜分子的相互作用所产生的非抗原特异性、非MHC限制性的共刺激信号(协同刺激信号或第二信号)才能有效活化、增殖和产生相应的生物效应。如果仅有抗原特异性信号而共刺激信号缺失，T细胞则表现为无反应状态或免疫耐受，甚至引起凋亡。 近年来分子生物学技术广泛应用于免疫学研究，共刺激分子被不断发现。CD154(CD40L、gp39、TRAP、TBAM)是分子量为33kDa的Ⅱ型跨膜糖蛋白，其基因定位于Xq26.3-27.1。人全长CD154的cDNA编码含261个氨基酸残基的多肽链，其氨基末端由22个氨基酸残基组成CD154的胞浆区，跨膜区含24个氨基酸残基，羧基端216个氨基酸残基组成含5个半胱氨酸的胞外区。CD154胞外区蛋白质的三维构象与TNF-α和LT-α折叠方式相似，因此属TNF超家族成员。CD154主要表达在活化的CD4~+T细胞和活化的血小板表面。此外，肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核巨噬细胞、树突状细胞、上皮细胞、平滑肌细胞等多种细胞均能表达CD154。CD154的表达受到严格调控，其特征是瞬时性。CD40-CD154相互作用的数分钟至1小时内，膜型CD154被蛋白质两株功能阻断型CD154单克隆抗体的生物学特性及其应用研究中文摘要水解形成可溶性CD巧4。 其受体CD40，是分子量为50kDa的细胞膜分子，属I型跨膜糖蛋白，为INFR超家族成员。CD40表达于多种细胞表面，包括树突状细胞、所有发育和分化阶段的B细胞、内皮细胞、胸腺上皮细胞、造血前体细胞及某些肿瘤细胞。 CD40一CD154信号传导在不同细胞可产生截然不同的效应，可为正性调节即导致细胞增殖或分化;也可为负性调节，即导致细胞生长抑制和/或凋亡。研究表明:CD40一CD154信号参与B细胞的发育、增殖和分化;浆细胞的形成;抗体的合成、分泌和类型转换;记忆性B细胞的形成;生发中心的形成和维持;树突状细胞的激发、分化和成熟;T淋巴细胞的分化、活化和增殖;记忆性T细胞的形成;内皮细胞粘附分子的改变;炎症因子的释放;白细胞在炎症部位的聚集等，是近年来倍受关注的细胞分子。 越来越多的研究表明，CD40一CD154信号在自身免疫中发挥重要作用。在几种自身免疫病动物模型(狼疮肾炎、自身免疫性糖尿病、系统红斑狼疮、胶原诱导的关节炎、实验性自身免疫性脑脊髓炎、多发性硬化症等)的实验研究中发现，给予阻断型anti一CD 1 54 mAb，均能不同程度地减少自身抗体或自身反应性T细胞的产生，缓解症状，延迟病程发展。研究发现，系统红斑狼疮患者与健康人比较，其外周血T淋巴细胞的表面分子如CD154和MHC一11等表达异常，血清sCD154水平增高，’肾脏组织有CD巧4-+细胞浸润。由此推测CD40一CD巧4信号是自身免疫反应的重要参与者。 数十年来，由于组织配型技术、器官保存技术和外科手术方法的不断改进，以及高效免疫抑制剂的陆续问世，器官移植的应用范围日趋扩大，移植存活率不断提高，器官移植已成为治疗多种疾病的有效手断。但移植排斥一直是同种组织和器官移植所面临的主要问题。在临床诸多克服移植排斥反应的方案中，免疫抑制剂的疗效最为确切。目前，特异性免疫抑制剂的开发研制是移植免疫的研究热点。 鉴于CD40一cD 154信号在细胞免疫和体液免疫中所发挥的重要作用，应用阻断型anti一cD154 11飞Ab阻断cD40一cD154信号控制移植排斥反应的研究越来越深入。动物移植模型实验证实，anti一CD154 n1Ab在皮肤、心脏、胰腺以及骨髓 II两株功能阻断型CD154单克隆抗体的生物学特性及其应用研究中文摘要移植中，均能有效地抑制移植排斥反应，延长移植物的寿命。CD40或CD154敲基因小鼠的移植模型亦证实，缺少了CD40一CD 154信号，移植排斥反应明显减弱。1999年，儿rk等将人源化的anti一CD154 mAb应用于rhrsus猴的肾移植取得成功。所有这些结果都为移植排斥的干预和移植耐受的诱导开辟了新途径。 本实验在成功获得两株能稳定分泌功能性鼠抗人CD154单克隆抗体的杂交瘤细胞株一一IBI和4FI的工作基础上，旨在进行如下研究: 第一部分Anti一CD154 mAb IBI和4FI在体外同种反应中的生物学特性研究 一、CD4+T细胞对同种抗原低反应性和特异性免疫耐受的诱导 移植排斥体外基础研究的主要方法之一是混合淋巴细胞反应(MLR)。MLR是来源于不同个体的淋巴细胞在体外混合培养，供体细胞表面HLA一11类抗原以及表达的共刺激分子可活化受体T淋巴细胞，活化的T淋巴细胞发生分化、增殖并产生相应的生物学效应。 本研究应用anti一CD154mAb IBI和4FI阻断MLR中CD40一CD154信号，通过检测培养上清的细胞因子(IL一2、IFN一帕水平、cD4+T淋巴细胞的增殖及其表型变化等指标，从而观察IBI和4FI阻断CD40一CD154信号在介导同种抗原的低反应性和诱导