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VvABCG20基因在葡萄花和胚珠中高表达,在营养器官中低表达;在有核葡萄和无核葡萄胚珠发育过程中的表达模式存在差异;在种皮中的表达要高于胚乳;VvABCG20基因直系同源的基因参与种皮软木脂的生物合成影响种子发育,因此推测VvABCG20基因可能通过转运种皮相关物质参与种子的发育,进而影响胚珠的败育。启动子在转录水平上参与调控下游相应基因表达,因此通过研究VvABCG20基因的启动子来探讨启动子对基因表达的影响。在本论文中,克隆了‘黑比诺’和‘无核白’中VvABCG20基因启动子,构建了VvABCG20基因启动子及其缺失片段与GUS基因的重组载体,通过瞬时转化烟草叶片来分析启动子全长及各片段的启动子活性,同时对VvABCG20基因启动子甲基化和转录因子调控分析。并且对调控VvABCG20基因的VvDof14基因及其家族进行胚珠发育表达分析和植物激素处理的表达分析。通过研究得出以下结果:1克隆了‘无核白’和‘黑比诺’的ABCG20基因启动子,发现都存在两种序列,全长及缺失41bp的序列,缺失序列在两个品种中无明显差异。构建启动子全长及缺失的GUS重组载体,通过瞬时转化烟草发现:启动子缺失5‘UTR之后对启动子活性没有明显影响;根据顺式元件的位置将启动子截断为p586,p283,p197,p155,启动子活性依次降低,推测-586~-155片段中存在增强基因表达的顺式作用元件。并且对VvABCG20基因启动子转基因拟南芥GUS染色分析发现,葡萄VvABCG20基因在生殖器官花和胚中高表达,在营养器官中低表达。通过重亚硫酸处理‘黑比诺’叶片和胚的DNA,扩增VvABCG20基因启动子区的CpG岛区域,测序发现甲基化水平在叶片和胚珠中保持稳定,甲基化不是造成基因在组织器官中表达差异的原因,具体的原因还需继续研究。2利用数据库预测可能与VvABCG20基因启动子互作的转录因子,通过酵母单杂交体系验证出VvDof14基因与VvABCG20基因启动子结合,根据Dof-motif的数量和位置,将启动子截断为P1-P7,VvDof14基因仅与P7片段结合;通过烟草共转化实验,进一步确定了VvDof14与VvABCG20基因全长启动子以及P7缺失体的结合,且是抑制GUS活性,即VvDof14负调控VvABCG20基因启动子活性。构建VvDof14基因与GFP重组表达载体,通过共聚焦显微镜观察发现葡萄VvDof14蛋白定位于细胞核,属于典型的转录因子。构建VvDof14-pGBKT7载体,转入酵母Y2HGOLD菌株验证自激活,发现VvDof14蛋白没有自激活活性,可以继续与其他蛋白的互作研究。3通过葡萄基因组网站和NCBI网站鉴定出葡萄Dof基因家族有25个成员,通过进化树分析,可以将25个家族基因分为3类,且每个类别内的基因有着相似的基因结构。利用ClustalX2软件对葡萄Dof家族25个基因的蛋白序列比对发现,Dof家族基因成员各序列之间相似性在19.4%到61%之间,在AA160到220之间相似性最高,为Dof家族基因保守结构域。通过RT-PCR分析发现,葡萄Dof家族基因在‘黑比诺’和‘无核白’胚珠中的表达模式存在多样性,大部分VvDof基因在两个品种胚珠中的表达都是有高有低,只有VvDof10在‘黑比诺’胚中的表达远高于‘无核白’,而且在胚珠发育的整个时期都呈相同的模式。葡萄Dof家族基因对不同GA3,ETH,MEJA植物生长调节剂的响应各有不同,其中VvDof6,VvDof14,VvDof20,VvDof22对3种激素的响应模式很一致,且VvDof14对MEJA的响应尤为明显。