大败毒胶囊由蒲公英、大黄、黄柏、赤芍、金银花、陈皮等十七味中药组成，属药品注册10类品种。具有清血败毒，消肿止痛的功效。原品种只有大黄和黄柏的定性鉴别，没有含量测定，为更好地控制药品内在质量，使本品具有安全、有效、稳定、可控的基本的药品特性，确保疗效，本课题对大败毒胶囊与质量有关的质量标准项目及稳定性进行了研究。通过反复试验，克服了因制剂组方大、药味多、成分复杂的困难，针对组成药味的特点和药物之间的干扰情况，首先制订原粉入药的天花粉的显微鉴别方法，然后优选出最佳试验条件，制订了大黄、黄柏、赤芍、白芷、陈皮、甘草的薄层鉴别方法，最后，对制剂进行充分研究和预试后，用高效液相色谱法对组方中大黄主要有效成分大黄素及赤芍主要有效成分芍药苷进行含量测定，在此基础上进行制剂稳定性研究，拟定出合理的效期。该课题制订的大败毒胶囊质量标准不但精密度高、准确度高、重现性好、经济简捷、可行性强，而且具有权威性、科学性、和进展性，能确保临床疗效和用药的安全。 第一部分大败毒胶囊的鉴别1大败毒胶囊的显微鉴别目的：建立大败毒胶囊中天花粉显微鉴别方法。方法：取大败毒胶囊内容物适量，加水合氯醛透化后，置显微镜下观察。 结果：可见类球形、半圆形、或盔帽形淀粉粒，直径6-48μm，脐点点状、短缝状或人字状，层纹隐约可见；石细胞长方形、椭圆形，类方形、多角形或纺锤形，直径27-72μm，壁较厚，纹孔细密。 结论：大败毒胶囊中天花粉的显微鉴别特征性强、重现性好，可作为质量控制指标之一。 2大败毒胶囊的薄层鉴别目的：建立大败毒胶囊特征性薄层层析方法。方法：按君、臣、佐、使的配伍关系及药味中有效成分的理化性质，制订了大黄、黄柏、赤芍、白芷、陈皮、甘草的薄层鉴别方法。 2.1大黄的鉴别：取本品内容物加氯仿、盐酸提取浓缩后作为供试品，同法制备大黄对照药材溶液及缺大黄的阴性样品溶液。照薄层色谱法吸取上述三种溶液于硅胶G板，石油醚-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)展开，置紫外光灯(365nm)下检视。 2.2黄柏的鉴别：取本品内容物甲醇超声作为供试品溶液。同法制成黄柏对照药材溶液及缺黄柏的阴性样品溶液。取盐酸小檗碱制成对照品溶液。照薄层色谱法吸取上述四种溶液于硅胶G板，正丁醇-冰醋酸-水(7：1：2)展开，置紫外光灯(365nm)下检视。 2.3赤芍的鉴别：取本品内容物提取并精制作为供试品溶液。取芍药苷对照品制成对照品溶液。按供试品制备方法同法制备缺赤芍的阴性样品溶液。照薄层色谱法吸取三种溶液于硅胶G板，乙酸乙酯—乙醇—水(10：2.5：2)展开，喷以5％香草醛硫酸试液，热风吹至显色清晰。 2.4白芷的鉴别：取本品内容物石油醚超声作为供试品溶液。同法制备白芷对照药材溶液及缺白芷的阴性样品溶液。照薄层色谱法吸取上述三种溶液于硅胶G板，石油醚(60-90℃)-乙醚(3：2)展开，置紫外光灯(365nm)下检视。 2.5陈皮的鉴别：取本品内容物乙醇超声精制作为供试品溶液。取橙皮苷对照品制成对照品溶液。按供试品制备方法制备缺陈皮的阴性样品溶液。照薄层色谱法吸取上述三种溶液于硅胶G板，乙酸乙酯-乙醇-水(10：2.5：2)展开，置紫外光灯(365nm)下检视。 2.6甘草的鉴别：取本品内容物乙醇超声精制作为供试品溶液。同法制备甘草对照药材溶液及缺甘草的阴性样品溶液。照薄层色谱法吸取上述三种溶液于硅胶G板，乙酸乙酯-乙醇-水(10：2.5：2)展开，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至显色清晰。置紫外光灯(254nm)下检视。 结果：2.1项大黄的鉴别：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。2.2项黄柏的鉴别：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个黄色荧光斑点，阴性无干扰。2.3项赤芍的鉴别：供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的蓝紫色斑点，阴性无干扰。2.4项白芷的鉴别：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。2.5项陈皮的鉴别：在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。2.6项甘草的鉴别：在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。 结论：大败毒胶囊中大黄、黄柏、赤芍、白芷、甘草的薄层鉴别方法均分离度好、特征性强、灵敏度高、重现性好，能作为本制剂的质量控制方法。 第二部分大败毒胶囊的含量测定1大败毒胶囊大黄中大黄素的含量测定目的：建立大败毒胶囊君药大黄主要有效成分大黄素含量测定方法。 方法：取样品，加甲醇回流提取后加酸水解，制备供试品溶液。取大黄素对照品，加甲醇溶解制备对照品溶液。再按供试品制备方法制备缺大黄的阴性样品溶液。用反相高效液相色谱法测定大黄素的含量。 色谱条件的选择：用紫外分光光度计扫描法确定大黄素的检定波长，通过不同的试验筛选最佳分离条件。方法学考察：(1)标准曲线制备：取不同浓度的大黄素对照品溶液，分别注入色谱仪，测定峰面积。以峰面积为横坐标，对照品大黄素的量为纵坐标，绘制标准曲线，得出回归方程。(2)稳定性试验：分别于0、1、3、3.5、4、4.5、5h测定供试品溶液峰面积。(3)重现性试验：取同一批样品，平行测定5次。(4)精密度试验：取同一大黄素标准品连续测定5次。(5)回收率试验：取已知含量的样品，精密加入大黄素对照品后，按样品制备方法制备样品，测定含量，计算回收率。 结果：通过紫外扫描结果选择438nm为测定大黄素的检测波长。用C18色谱柱(4.6mm×200mm，5μm)；乙腈-水-冰乙酸(68：32：1)为流动相；柱温：室温；流速0.4ml/min。大黄素分离度好，柱效高，对称性好，大黄素在0.0522-0.522μg范围内有良好的线性关系。回归方程为含量=面积×1.222×10-7-2.022×10-3，回归系数：r=0.9996。样品在5小时内稳定，RSD为0.7％；精密度高，RSD为0.31％；重现性好：RSD为0.25％；平均回收率为98.91％，RSD为1.66％。 结论：用该方法测定大黄素含量准确度高、精密度好、简便快捷，可用于大败毒胶囊中大黄素的含量测定。2大败毒胶囊赤药中芍药苷的含量测定 目的：建立大败毒胶囊臣药赤芍主要有效成分芍药苷含量测定方法。 方法：取样品，加稀乙醇超声提取，制备供试品溶液。并按供试品制备方法制备缺赤芍的阴性样品溶液。取芍药苷对照品，加稀乙醇溶解制备对照品溶液。用反相高效液相色谱法测定芍药苷的含量。 色谱条件的选择：用紫外分光光度计扫描法确定芍药苷的测定波长，通过不同的试验筛选最佳分离条件。方法学考察：(1)标准曲线制备：取不同浓度的芍药苷对照品溶液，分别注入色谱仪，测定峰面积。以峰面积为横坐标，对照品芍药苷的量为纵坐标，绘制标准曲线，得出回归方程。(2)稳定性试验：将供试品溶液分别于不同时间测定其峰面积。(3)重现性试验：取同一批样品，平行测定5次。(4)精密度试验：取同一芍药苷标准品连续测定5次。(5)回收率试验：取已知含量的样品，精密加入芍药苷对照品后，按样品制备方法制备样品，测定含量，计算回收率。 结果：通过紫外扫描结果选择230nm为芍药苷的检测波长。用C18色谱柱(4.6mm×200mm，5μm)；乙腈-0.1％磷酸(13：87)为流动相；柱温：室温；流速0.85ml/min。芍药苷分离度好，柱效高，对称性好，芍药苷在0.08g-1.080μg范围内有良好的线性关系。回归方程为含量=面积×3.126×10-7+5.583×10-3，回归系数：r=0.9999。样品在5小时内稳定，RSD为0.68％；精密度高，RSD为0.50％；重现性好：RSD为0.88％；回收率符合规定：RSD为0.89％。 结论：用该方法测定芍药苷含量准确度高、精密性好、简便快捷，可用于大败毒胶囊中芍药苷的含量测定。第三部分稳定性试验 目的：通过稳定性试验，考察大败毒胶囊在高温、高湿的影响下随时间变化的情况，确定药品的有效期，同时为药品的生产、包装、贮藏、运输提供科学依据。 方法：按中国药典2000年版附录ⅩⅨC项下稳定性试验指导原则，取三批样品，模拟上市包装，进行加速试验及长期留样试验，考察大败毒胶囊的稳定性。结果：加速试验及长期留样试验结果表明大败毒胶囊各项检测指标均符合规定，稳定性良好。 结论：大败毒胶囊在上市包装条件下稳定，由加速试验的数据暂定其有效期两年。