Circ0001313靶向负调控miR-338-3p抑制结肠癌细胞的辐射敏感性

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【目的】探究环状RNA0001313(Circular RNA0001313,Circ0001313)对人结肠癌细胞辐射敏感性的作用及其机制研究,为临床上结肠癌的放射治疗提供新靶点及策略。【方法】1.对结肠癌细胞SW480和SW620进行不同剂量辐照,且分别在不同时间点检测结肠癌细胞中Circ0001313及下游靶基因的表达量,评估辐照对Circ0001313表达量的影响。2.RNA干扰技术沉默结肠癌细胞的Circ0001313基因,定量即时聚合酶链锁反应(Quantitative real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测Circ0001313及下游靶基因的表达量。并探讨在沉默Circ0001313基因时,辐照对结肠癌细胞中细胞活力、caspase-3表达及克隆集落的影响,评估Circ0001313与辐射敏感性的关系。3.生物信息学技术预测Circ0001313的下游靶基因。4.进行双荧光素酶报告基因检测Circ0001313与下游靶基因微小RNA-338-3p(microRNA-338-3p,miR-338-3p)的相互作用。5.进行RNA免疫共沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RIP)实验,探讨Circ0001313及miR-338-3p能否相互作用。6.检测Circ0001313不同表达时,miR-338-3p的表达水平。7.使用miR-338-3p抑制剂,并利用RNA干扰技术沉默结肠癌细胞的Circ0001313基因,运用RT-PCR技术检测miR-338-3p的表达量。并探讨在沉默Circ0001313基因时,miR-338-3p抑制剂对结肠癌细胞中细胞活力、caspase-3表达及克隆集落的影响,评估miR-338-3p抑制剂对结肠癌细胞辐射敏感性的影响。【结果】1.辐照下结肠癌细胞SW480和SW620的Circ0001313的表达量增加,且具有剂量、时间依赖性;而miR-338-3p的表达减少,与Circ0001313呈相反趋势。2.沉默Circ0001313提高了结肠癌细胞的辐射敏感性。3.miR-338-3p可能是Circ0001313的下游靶基因。4.Circ0001313能与miR-338-3p直接结合。5.Circ0001313能与miR-338-3p相互作用。6.Circ0001313负调控miR-338-3p的表达。7.miR-338-3p促进了沉默Circ0001313对结肠癌细胞的辐射增敏作用。【结论】1.Circ0001313能抑制结肠癌细胞的辐射敏感性。2.Circ0001313靶向负调控miR-338-3p抑制结肠癌细胞的辐射敏感性。
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