目的利用低氧预适应小鼠模型,观察低氧预适应小鼠海马组织中促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)及其受体EPOR的表达变化,同时利用甲基转移酶抑制剂5-aza-cdR,探究低氧预适应形成过程中EPO发挥神经保护作用与其启动子甲基化变化的关系。方法取体重18～22 g,6-8周龄成年雄性小鼠进行侧脑室注射甲基转移酶抑制剂5-aza-cdR,术后1 d进行低氧预适应模型复制:小鼠随机分为5-aza-cdR处理组和BSA对照组,然后对其进行低氧处理,根据小鼠低氧暴露次数以及低氧暴露几天处死的天数分组。各组小鼠均断头处死,剥离海马。Real-time PCR检测各组小鼠海马组织中EPO、EPOR以及三种甲基转移酶DNMT1、DNMT3A与DNMT3B m RNA的表达水平。Western blot检测各组小鼠海马组织中EPO与EPOR蛋白水平的变化。PCR扩增小鼠海马组织EPO启动子区序列(0-320bp),并插入到含有荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic中构建重组质粒,利用双荧光素酶报告基因检测系统检测低氧预适应对EPO启动子区荧光素酶表达活性的影响。利用活力测定试剂盒检测小鼠海马组织中DNMT1、DNMT3B与总DNMT活力的变化。结果(1)急性重复低氧预适应处理小鼠后,DNMT3B的m RNA表达即刻下调(P<0.05),继续延长低氧预适应时间到第1 d,DNMT3A的m RNA表达才发生下调(P<0.05),而DNMT1 m RNA的表达量在低氧预适应第3 d后才出现降低(P<0.05),且这种抑制作用并未受到5-aza-cdR处理的影响。(2)低氧预适应后2 d与5-aza-cdR单独处理均能使EPO m RNA的表达水平升高(P<0.05)。(3)急性重复低氧预适应降低了小鼠海马组织EPOR m RNA的表达水平(P<0.05),而在低氧预适应晚期相其表达量又增加(P<0.05),并且这两种作用均未受到5-aza-cdR处理的影响。(4)低氧预适应也促进了小鼠海马组织EPO与EPOR的蛋白表达(P<0.05),这与转录水平的变化相吻合。并且,对其进行5-aza-cdR处理后,EPOR的蛋白表达水平在低氧的情况下也增加(P<0.05)。(5)荧光素酶活性检测结果表明,低氧预适应组的EPO启动子活性更加突出(P<0.05)。(6)低氧预适应处理对小鼠海马组织DNMT1的活力没有显著影响,但却降低了DNMT3B与总DNMT的活力。结论DNMT1、DNMT3A与DNMT3B的表达降低可能使某些基因启动子序列发生低甲基化,从而上调这些基因的表达。因此,EPO与EPOR在低氧预适应条件下表达增加可能与DNMT介导的EPO启动子区甲基化程度以及甲基化酶的活力有关。