用于疫苗输送的功能化磷酸钙纳米载体的制备及研究

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疫苗在预防人类疾病方面有着重要的意义,疫苗佐剂的出现解决了某些疫苗低免疫原性的问题,并且为少剂量接种提供了可能,开发更为安全、有效、广谱的免疫佐剂,是扩大疫苗应用范围、研究新型疫苗的重要环节。本论文利用免疫活性多糖—甘露聚糖(mannan)为稳定剂制备了一种磷酸钙纳米载体,该纳米载体在实现疫苗传递的同时还可作为疫苗佐剂,用于增强免疫应答反应。作为抗原传递系统该载体为疫苗的新型佐剂研究提供了思路。该课题采用高碘酸钠(NaIO4)氧化甘露聚糖(mannan, MN)得多醛基氧化甘露聚糖,与帕米膦酸二钠(Pa)经还原胺化反应,获得带有磷酸根的甘露聚糖(Pa-MN),以此产物为稳定剂,依靠磷酸根与钙离子的静电吸附作用,通过共沉淀法制备了功能化磷酸钙(CAP)纳米粒。核磁共振、元素分析、与羟基磷灰石的结合、导电率测定等实验证明甘露聚糖-双磷酸盐复合物(Pa-MN)的成功合成,与伴刀豆球蛋白A(ConA)的特异性结合实验表明,合适的修饰度可保持甘露聚糖结构的完整性。通过动态光散射(DLS)粒度仪、扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)表征发现,该功能化纳米粒平均粒径为130.4±1.9nm,且分散性良好。BCA法和SDS-PAGE凝胶电泳用于测定抗原的装载量,结果表明该纳米粒对抗原的包封率为52.1%,细胞毒性实验结果显示制备的磷酸钙纳米粒具有良好的细胞相容性,在细胞吞噬实验中该纳米载体可提高细胞对抗原的摄取率,Elisa实验测定小鼠血清中OVA特异性抗体IgG, IgGl,IgG2a水平,结果显示该功能化纳米粒能显著提高抗OVA抗体水平,血清中IgG, IgGl,IgG2a水平比传统铝佐剂组抗体水平大于1.5倍,表明该载体具有作为免疫佐剂的良好潜力。
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