肾衰泄浊汤调控TGF-β1/Smads信号通路干预慢性肾衰大鼠肾间质纤维化的机制研究

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目的:评估肾衰泄浊汤对腺嘌呤灌胃所致慢性肾衰(chronic renal failure,CRF)大鼠体质量、饮水量、尿量、一般活动情况、肾功能相关指标以及肾组织病理的影响,并基于转化生长因子-β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)/Smads通路探究肾衰泄浊汤抗肾间质纤维化(Renal interstitial fibrosis,RIF)的相关作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为6组:正常组,模型组,中药低、中、高浓度组,西药组,每组10只。除正常组外,其余各组采用3周腺嘌呤灌胃法复制CRF大鼠模型。造模结束后中药低、中、高浓度组分别给予不同浓度的肾衰泄浊汤(9.375、18.75、37.5g·kg-1),西药以科素亚作为标准对照,正常组与模型组给予生理盐水,每天灌胃给药1次,连续28d。观察大鼠的一般活动,记录大鼠的体重、尿量和饮水量指标;检测大鼠血清中的血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)和胱抑素C(cystatin C,Cys C)含量;观察HE染色后大鼠的肾脏组织病理改变;ELISA法测定血清中的TGF-β1含量;以GAPDH为内参基因,采用RT-PCR法和Western Blot法分别检测肾组织中Smad3、Smad4基因和蛋白的相对表达。结果:与正常组相比,腺嘌呤灌胃致CRF大鼠血清中的Scr、BUN、β2-MG和Cys C均出现显著上升(P<0.01);肾组织显微镜下可见肾小球、肾小管结构异常,肾小管中充满2,8-二羟基腺嘌呤结晶,肾间质内出现炎性浸润以及RIF;均出现弓背蜷缩、背部发凉、爬行缓慢、反应迟钝、体质量增长缓慢、饮水量与尿量明显增加表现;血清中TGF-β1的含量以及肾组织中Smad3、Smad4的m RNA与蛋白表达水平均出现显著升高(P<0.01)。与模型组相比,肾衰泄浊汤能降低腺嘌呤灌胃致CRF大鼠血清中的Scr(低、中、高浓度:P<0.01)、BUN(中、高浓度:P<0.01)、β2-MG(中、高浓度:P<0.01)和Cys C(中、高浓度:P<0.01)含量,减少肾组织的病理损害;改善CRF大鼠弓背蜷缩、背部发凉、爬行缓慢、反应迟钝、体质量增长缓慢的虚弱表现,降低其饮水量(低、中、高浓度:P<0.01)和尿量;降低血清中TGF-β1(中、高浓度:P<0.01)的含量;下调肾组织中Smad3、Smad4的m RNA(Smad3:低、中、高浓度:P<0.01;Smad4:中浓度:P<0.05,高浓度:P<0.01)与蛋白(Smad3、Smad4:中、高浓度:P<0.01)表达水平。结论:肾衰泄浊汤能改善腺嘌呤灌胃致CRF大鼠的相关虚弱表现,降低CRF大鼠血清中的Scr、BUN、β2-MG与Cys C含量,减少CRF大鼠肾组织的病理损伤,其抗RIF机制与TGF-β1/Smads信号通路中TGF-β1、Smad3和Smad4的抑制有关,具体作用机理还需后续的深入研究。
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