戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus ,HEV)过去曾被认为是一种经肠道传播的非甲-非乙型肝炎病毒,在流行普遍的发展中国家在公共卫生方面受到广泛的关注。HEV主要感染青少年,虽然全球成年人HEV的感染率较低,但是对怀孕妇女的病死率却高达20%。戊型肝炎病毒是一种无包膜的正义单链RNA病毒,主要经粪便—口传播,在人群中可以通过饮用HEV污染的水引起暴发流行。HEV基因组全长约为7.5kb,它具有3个互相重叠的开放阅读框架即ORF1、ORF2和ORF3,并且5‘-端有27个核苷酸的非编码区,3’-端为非结构区。ORF1起于核苷酸第28位,延伸5079bp,终止于核苷酸第5107位,长约5kb,它主要编码与HEV复制相关的非结构蛋白,其中存在几个相对保守区域,分别编码甲基转移酶,蛋白酶,RNA解链酶以及RNA聚合酶。ORF2起于核苷酸第5107位,延伸1980bp,终止于Poly(A)上游63个核苷酸处,长约2kb,编码病毒衣壳蛋白,为主要的结构基因编码区,其编码的氨基酸第5-22位信号肽序列。ORF3含有369个核苷酸,与ORF1轻度重叠(1bp),与ORF2广泛重叠(328bp),编码产物为磷蛋白,与细胞的支架及HEV特异性免疫活性有关。然而急性戊型肝炎病例不仅存在于发展中国家,而且在发达国家也有很多受感染的病人。发达国家的病人感染途径至今仍然是一个谜,但是许多人都认为动物很有可能是个重要的传播者。最近在美国猪源HEV的发现证明了猪很有可能传播HEV。为了了解我国国内HEV的流行情况和我国HEV的基因型,我们实验对此进行了详细的调查与研究。本研究采用两步夹心ELISA方法对我国部分省区猪的戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus, HEV)感染情况进行了调查,实验共采集全国18个省、市、自治区的48个养猪场不同月龄的1706头猪,其中2月龄以下猪有521只,2-6月龄的猪有611只,6月龄以上的猪有574只,结<WP=9>果显示其中1126份为HEV抗体阳性,平均阳性率为66.00%,在所有检测的48个猪场中,仅有一个猪场没有检测到HEV抗体,有6个猪场抗体阳性率在20%以下;有13个猪场抗体阳性率为20%-60%,猪群抗体阳性率达到60%-90%有16个,阳性率高于90%的猪场有12个,同时HEV的抗体阳性率随着月龄变化而有所不同,其中6月龄以上的猪的抗体阳性率最高为90.94%,其次为2-6月龄的猪的抗体阳性率为70.05%,最低的是2月龄以下的仔猪抗体阳性率为33.78%,这些结果表明猪群的抗体阳性率有可能随着月龄的增长而有所升高,说明我国大部分集约化养殖场均存在HEV感染。同时本实验还在抗体阳性率较高的某个猪场采集了血清和粪便样品,用巢式PCR对其进行克隆和扩增,结果在猪粪中成功扩增并克隆了HEV ORF2 N端的主要抗原决定区的部分基因片断,同时还对这一片断进行了原核表达载体的构建;但是在血液中没有扩增成功。该段目的基因片段与已经发表的HEV基因型I中的印度株,HEV基因型II中的墨西哥株,HEV基因型III中的美国HEV us-1株,中国1株人的HEV,日本1株HEV以及列入基因型IV的台湾株基因序列等10个地方的基因序列进行比较, 序列分析表明核苷酸序列的同源性最高为86.4%,最低的也为73.0%;氨基酸的同源率最高为99.1%,最低也为94%。 同时,把目的基因片断已经成功克隆到PET-30a(+),为下一步原核表达做好准备。