SV40转化人角朊细胞系的生物学特征及其创面移植的实验研究

来源 :第四军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Melissachen
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正常人角朊细胞体外培养时生长慢,长期传代困难,因而成为制约其基础研究和临床应用的重要因素;而以往在主要基于肿瘤细胞恶性转化机理的研究中发现,采用SV40病毒基因进行细胞体外转化可以获得能够在体外长期传代培养、保持良好分化功能、无致瘤性的人角朊细胞系,通过对这类角朊细胞的体外培养及活体移植,无疑能够克服正常人角细胞体外培养时的不利因素,并对于充分利用角朊细胞深入开展创面组织修复的研究具有重要意义。为此,本研究在“SV40病毒对人角朊细胞的体外转化”、“转化细胞的鉴定及其生物学特征观察”和“转化角朊细胞移植于裸鼠皮肤创面的观察”三个方面进行了实验。结果显示: 1.人角朊细胞经SV40转化后出现镜下形态特征较为明显的细胞克隆,易于挑选分离,分别通过传代培养,获得了多个角朊细胞系;经细胞基因组DNA印迹实验和SV40大T抗原间接免疫荧光检测,证实大SV40大T基因已整合至部分克隆的人角朊细胞基因组DNA中并在细胞核内正常表达大T抗原;转化细胞保持了正常角朊细胞“锚着依赖性”生长的特征:经裸鼠致瘤性实验,较为确定地筛选出了2个无致瘤性的阳性转化细胞系。 2.阳性转化角朊细胞可表达角蛋白和波形蛋白,第Ⅷ因子表达阴性,细胞间形成桥粒结构,进一步证实其来源于人表皮角朊细胞并具有分化细胞特征性结构:核型分析表明其遗传性改变程度低;体外接种后,具有与正常角朊细胞相似的细胞克隆形成率:细胞增殖动力学特征分析显示长期传代的转化角朊细胞对数生长期细胞倍增时间为1.84~2.36d,长于正常人角朊细胞的1.05d;转化角朊细胞系已体外培养190d,传代至25
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