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目的:克隆人白细胞介素(interleukin,IL)-38基因,构建其真核、原核表达载体,完成IL-38重组蛋白的表达、纯化及活性分析;构建IL-38慢病毒表达载体,并进行其慢病毒包装与鉴定,研究IL-38对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的作用及机制。方法:从人皮肤组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法扩增IL-38基因的全长编码序列,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO,构建其pcDNA-3.1-hIL-38-V5-His重组质粒;以pcDNA-3.1-hIL-38-V5-His为模板扩增IL-38成熟蛋白编码区,构建IL-38 pET-44-hIL-38原核表达载体,将测序正确的表达载体转化入BL21(DE3)大肠杆菌表达菌株中获得IL-38表达工程菌株,用适当浓度的IPTG诱导工程菌株表达IL-38重组蛋白,并利用其C末端的组氨酸标签(His-tag)进行镍离子亲和层析纯化目的蛋白,将纯化的重组IL-38作用于脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的THP-1细胞,研究纯化IL-38蛋白的生物学活性;构建IL-38慢病毒表达载体pLVX-hIL-38-IRES-Green1,将该重组表达载体与其余三个包装载体共转染293T细胞株,包装并收集慢病毒,建立博来霉素(bleomycin,BLM)滴鼻给药C57BL/6雄性小鼠诱导的肺纤维化动物模型,将IL-38病毒上清滴鼻小鼠,研究IL-38对小鼠肺纤维化发病的影响。结果:构建的IL-38真核、原核及慢病毒表达载体的测序结果均与GenBank中的基因序列一致;IPTG诱导产生的IL-38蛋白主要以可溶性形式存在,纯化的目的蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳分析和Western blot鉴定发现,蛋白纯度可达98%,细胞实验证明纯化的目的蛋白具有较高的生物学活性;动物实验结果表明,IL-38可减少肺部炎症细胞的浸润、细胞外基质及胶原的沉积,可改善肺肺泡壁结构,可抑制肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、IL-4、IL-6、IL-17、单核细胞趋化蛋白(monocyte chemotactic protein,MCP)-1、巨噬细胞炎性蛋白(macrophage inflammatory protein,MIP)-2、粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)等前炎症因子和促纤维化因子的产生,也可促进抗纤维化因子干扰素(interferon,IFN)-γ的产生。结论:本文构建了IL-38的真核、原核表达载体和慢病毒载体,成功制备了具有生物活性的IL-38重组蛋白并且成功包装了其慢病毒,利用慢病毒介导表达的IL-38,对IL-38与博来霉素诱导小鼠肺纤维化的关系做了初步探讨,发现它具有减缓小鼠肺纤维化的作用,为进一步进行IL-38的理论研究及临床应用研究奠定了基础。