目的:本研究旨在探讨mi R-15a-5p通过调控YAP1表达影响CML细胞生物学特性及其对IM敏感性的变化,为丰富现有CML细胞对IM耐药的分子生物学机制提供新的理论基础和依据,为研究逆转CML细胞对IM耐药提供新思路。方法:1、利用CCK-8方法检测慢粒非耐药细胞株K562、耐药细胞株K562G在不同浓度伊马替尼（IM）刺激48h后的细胞活力,并计算IC50。q RT-PCR技术检测K562、K562G细胞以及健康供者外周血单个核细胞（PBMC）的mi R-15a-5p的表达差异。2、验证下调mi R-15a-5p表达对K562细胞耐药性的影响以K562为实验细胞,分别转染空载体对照组（NC）、mi R-15a-5p抑制剂（inhibitor）48h后,q RT-PCR技术检测转染效率。K562细胞转染NC、mi R-15a-5p inhibitor后48h利用CCK-8方法检测细胞活力和IC50;转染mi R-15a-5p inhibitor组及NC对照组48h后分别进行加0.1μM IM和不加IM处理48h,流式细胞术检测细胞凋亡率、Western Blot检测细胞增殖蛋白Cyclin D1以及凋亡蛋白Caspase3的表达差异。3、验证上调miR-15a-5p表达对K562G细胞耐药性的影响以K562G为研究对象,分别空载体对照组（NC）、mi R-15a-5p模拟剂（mimic）48h后,q RT-PCR技术检测转染效率。K562G细胞转染NC、mi R-15a-5p mimic后48h利用CCK-8方法检测细胞活力和IC50;转染mi R-15a-5p mimic组及NC对照组48h后分别进行加5μM IM和不加IM处理48h,流式细胞术检测细胞凋亡率、Western Blot检测Cyclin D1蛋白以及Caspase3蛋白的表达差异。4、利用miRNA靶基因数据库（mi RDB、mi RTarbase和Targetscan）对mi R-15a-5p的靶基因进行预测,并利用双荧光素酶报告系统进行验证。5、使用siRNA敲低K562G细胞的YAP1表达,Western Blot方法和q RT-PCR技术检测细胞敲低效率;CCK-8试剂盒检测转染si RNA 48h后细胞增殖情况;Western Blot方法检测增殖和凋亡相关蛋白表达情况。结果:1、K562细胞的IC50为0.16μM,K562G细胞的IC50为10.94μM。q RT-PCR结果显示,mi R-15a-5p在健康供者PBMC表达最高,在K562G细胞表达最低,三者之间两两比较均具有统计学差异。2、下调mi R-15a-5p表达可降低K562对IM的敏感性qRT-PCR技术检测各组mi R-15a-5p的表达,结果显示,与NC组相比,mi R-15a-5p inhibitor可明显降低K562细胞中mi R-15a-5p表达（P<0.01）。CCK-8结果显示,转染组应用相同浓度IM处理后,mi R-15a-5p inhibitor组K562细胞活力较对照组增加,且对IM的IC50值上升。流式细胞术结果显示,与NC组相比,mi R-15a-5p inhibitor组凋亡率降低（P<0.05）;与NC+IM组相比,mi R-15a-5p inhibitor+IM组凋亡率降低（P<0.05）;NC+IM较NC组凋亡率增加了2.4倍,而mi R-15a-5p inhibitor+IM组较mi R-15a-5p inhibitor组凋亡率只增加了2.1倍,表明抑制mi R-15a-5p表达后降低了K562细胞对IM敏感性。Western Blot结果显示,与NC组相比,mi R-15a-5p inhibitor组增殖蛋白Cyclin D1表达增加,凋亡蛋白Caspase-3表达下降;与NC+IM组相比,mi R-15a-5p inhibitor+IM组Cyclin D1蛋白表达增加,Caspase-3蛋白表达下降,表明下调mi R-15a-5p表达后能够逆转应用IM引起的Cyclin D1蛋白表达下降,Caspase-3蛋白表达增加。3、上调mi R-15a-5p表达可增加K562G细胞对IM的敏感性qRT-PCR技术检测各组mi R-15a-5p的表达,结果显示,与NC组相比,mi R-15a-5p mimic可明显上调K562G的mi R-15a-5p表达（P<0.001）。CCK-8实验结果显示,应用相同浓度IM处理各转染组,mi R-15a-5p mimic组K562G细胞活力较对照组明显受抑制,且对IM的IC50下降。流式结果显示,与NC相比,mi R-15a-5p mimic组凋亡率增加（P<0.05）;与NC+IM组相比,mi R-15a-5p mimic+IM组凋亡率增加（P<0.05）;NC+IM较NC组凋亡率增加了1.7倍,而mi R-15a-5p mimic+IM组较mi R-15a-5p mimic组凋亡率增加了1.9倍,提示过表达mi R-15a-5p后K562G细胞对IM更敏感。Western Blot结果显示,与NC相比,mi R-15a-5p mimic组Cyclin D1蛋白表达降低,Caspase-3蛋白表达增加;与NC+IM组相比,mi R-15a-5p mimic+IM组Cyclin D1蛋白表达降低,Caspase-3蛋白表达增加,K562G细胞过表达mi R-15a-5p后可以协同促进IM应用引起的Cyclin D1蛋白表达降低和Caspase-3蛋白表达增加。4、YAP1是mi R-15a-5p的靶基因使用mi RDB、mi RTarbase和Targetscan数据库共同预测得到mi R-15a-5p靶基因为47个,YAP1为其中之一,q RT-PCR和Western Blot结果都显示与K562相比,K562G中YAP1表达更高,差异有统计学意义（P<0.05）,且与mi R-15a-5p表达呈负相关,进一步进行双荧光素酶报告实验验证,结果显示,与对照组相比,转染了hsa-mi R-15a-5p后,h-YAP1-MUT的报告荧光表达相对于h-YAP1-WT的报告荧光表达明显上升（P<0.01）,说明hsa-mi R-15a-5p与h-YAP1 3’UTR上的该位点有明显的相互作用,以上结果说明YAP1是mi R-15a-5p直接作用靶点。5、YAP1促进K562G细胞凋亡抑制增殖K562G细胞转染si-YAP1和空载体（对照组）48h后,CCK-8方法检测转染组和对照组细胞增殖情况,发现转染si-YAP1组较对照组细胞增殖明显抑制（P<0.01）,Western Blot结果发现Cyclin D1蛋白表达降低,Caspase-3蛋白表达增加,以上结果表明上调K562G中mi R-15a-5p表达或抑制YAP1表达均可促进K562G细胞凋亡、抑制增殖,提示mi R-15a-5p通过靶向YAP1发挥作用。结论:低表达mi R-15a-5p可抑制K562细胞凋亡,促进其增殖,并促进K562细胞对IM耐药;过表达mi R-15a-5p抑制YAP1表达促进K562G细胞凋亡,抑制增殖,并促进K562G细胞对IM敏感,提示mi R-15a-5p可能通过调控YAP1表达影响慢粒细胞增殖、凋亡以及对IM的敏感性。