黄檗种子质量标准及休眠生理研究

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芸香科植物黄檗Phellodendron amurense Rupr.为常用中药材关黄柏的基原植物。关黄柏目前仍主要来源于野生黄檗资源,由于大量砍伐及生态环境的破坏,资源破坏十分严重,处于衰竭状态。黄檗野生资源的恢复由于存在种群自我更新障碍及种子生理后熟特性十分困难,药材生产及资源保护主要以人工种植及迁地保护的形式进行,黄檗的人工种植及自我更新均以种子为繁殖材料。本论文从黄檗种子的质量检验规程及分级标准、种子休眠机制、种子休眠解除方法、地理生态因子对种子品质的影响等方面进行研究,以期从采种、控制种子质量、提高种子发芽率等方面入手,使人工种植黄檗时的种源质量得到有效保障。同时,通过分析地理生态因子对种子品质的影响,从生理生态的角度探讨种子休眠特性的形成机制。通过对黄檗种子扦样、净度、千粒重、含水量、生活力、发芽率等指标的研究,确定黄檗种子质量检验方法为:徒手减半法取试验样品;水选法清选黄檗种子;百粒法测定重量;高温烘干法烘干3h测定含水量;四唑染色法测定种子生活力,种子室温下浸泡24h后,除去种皮和胚乳,暴露整个种胚,35℃条件下用0.4%四唑溶液染色5h;在纸上发芽床上,12℃/24℃变温条件下进行发芽实验;采用间接培养法进行种子带菌检测,直接法检测种子的带虫情况。对来源于黑龙江、吉林、辽宁和北京的62份黄檗种子样本进行检验,各项检验数据进行聚类分析作为分级依据的参考,初步制定出黄檗种子的质量分级标准。在黄檗种子休眠解除方法的研究中发现,低温层积处理可显著提高种子的发芽率;恒温层积处理可将发芽率从13.50%提高到89.50%,长时间层积时,4℃优于8℃低温层积;变温层积处理可将发芽率从13.50%提高到90.00%,并可缩短层积所需时间,4℃-8℃变温层积处理的效果优于8℃-4℃变温层积处理;当种子具备一定发芽能力后,继续低温层积会导致发芽率的降低。6-BA、NAA、KNO3、PEG溶液浸种可提高种子发芽率;GA3、6-BA、NAA、KNO3、PEG溶液浸种后4℃层积30d可有效打破种子休眠,可分别将发芽率从11.50%提高到92.00%、97.00%、94.00%、94.50%、83.00%。在黄檗种子休眠生理的研究中表明,种子休眠类型为生理休眠,在休眠解除过程中无形态上的变化。在休眠解除的过程中,种子中可溶性糖的含量呈现先升高后降低的趋势,从7.96mg/g升高到11.12mg/g后又降至9.65mg/g;可溶性蛋白含量在持续上升后,保持在较高水平,从4.11mg/g上升到5.29mg/g;脂肪酶的活性逐渐增强,在休眠基本解除时,活性稍有降低,从118.29U/gprot上升到489.93U/gprot后又降至333.47U/gprot。在休眠解除的过程中,琥珀酸脱氢酶的活性大幅下降,从3.67U/mgprot降至1.26U/mgprot,丙酮酸激酶的活性总体上也呈下降趋势,从7.68U/gprot降至4.37U/gprot,而葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性在上升后保持稳定,从1.19U/gprot上升至2.28U/gprot,随着黄檗种子休眠的解除,种子主要呼吸途径由TCA循环和EMP途径逐渐转变为PPP途径。在休眠解除的过程中,GA3和ZT含量总体上呈上升趋势,层积时间过长会导致含量的降低;ABA的含量总体上呈下降趋势;GA3/ABA和ZT/ABA含量的比值变化趋势与GA3、ZT含量的变化趋势基本一致,总体上呈上升趋势。在地理生态因子对黄檗种子品质影响的研究中发现,实粒种子比例与花期积温、年日照时数呈极显著正相关,与生长期积温呈显著正相关,与年降水呈极显著负相关;种子千粒重与花期日照、年日照时数呈显著正相关,与海拔高度呈极显著负相关;发芽率与花期积温、生长期积温、年均温、年日照时数、生长期天数均呈极显著正相关,与花期降水呈极显著负相关,与年降水呈显著负相关,与海拔高度呈极显著负相关,结果说明,地理生态因子不仅对种子的品质会有影响,而且对种子的休眠程度也会产生影响。树龄与种子、果实的各种性状均无显著性相关。
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