论文部分内容阅读
目的:建立检测信号强度和检测物浓度呈正相关的新型免疫层析技术,并且应用于小分子三价铬离子(Cr3+)和盐酸克伦特罗(Clenbuterol, CL)的检测。方法:抗Cr3+-EDTA单克隆抗体标记在金纳米颗粒(Gold nanoparticles, Au-NPs)上,制备了荧光淬灭剂(mAb-gold quencher),然后喷涂于结合垫上。通过酰胺反应使完全抗原Cr3+-EDTA-BSA标记于荧光纳米颗粒(Fluorescent nanoparticles, FNPs)上,制备了Cr3+-EDTA-BSA-FNPs。所制备的Cr3+-EDTA-BSA-FNPs和一定量的Cr3+-EDTA-BSA一起喷涂在硝酸纤维素膜(Nitrocellulose membrane, NC膜1的特定区域作为检测线(Test line, T-line)。用同样方法制备BSA-FNPs,并且喷涂在NC膜的特定区域作为校准线(Calibration line, C-line)。试纸条组装完成后进行了一系列的条件优化。所制备的荧光淬灭免疫层析试纸条(immunochromatographic strip, ICS)检测了水中的Cr3+,其结果用Image J图像处理软件分析以得到定量的检测结果。研究了荧光淬灭ICS的特异性,并且用荧光淬灭ICS检测了自来水中的Cr3+,将其结果和ICP-AES检测的结果进行了比较。用同样的方法制备了检测CL的荧光淬灭ICS。经过一系列的条优化后,检测了猪尿中的CL,并且对荧光淬灭ICS的特异性进行了研究。结果:检测Cr3+荧光淬灭ICS的检测时间为15min,检测信号强度和Cr3+浓度呈正相关。Cr3+浓度大于1.56ng/mL时,试纸条T-线荧光信号出现,并且T-线荧光信号随着Cr3+浓度的增加而增强。所制备的荧光淬灭ICS的最低检测限为1.56ng/mL,检测范围为6.25ng/mL-800ng/mL,与Ca2+,Fe3+和Fe2+分别有1.56%,15%和17.5%的交叉反应率,和其它金属离子没有交叉反应。制备的ICS检测了自来水中的Cr3+,其回收率在94.7%-101.7%之间,和ICP-AES的检测结果接近。检测CL的荧光淬灭ICS检测时间为7min。在激发光下,试纸条T-线的荧光信号强度和CL浓度呈正相关,试纸条的灵敏度为0.04ng/mL。在自然光下,所制备的试纸条可以作为传统的胶体金试纸条,其检测信号强度和CL浓度呈反相关,试纸条的灵敏度为2.5ng/mL。荧光淬灭试纸条检测了猪尿中到的CL,检测结果和检测PBS中CL的检测结果接近。所制备的荧光淬灭ICS与clenbuterol, ractopamine,phenylethanolamine A, salbutamol没有交叉反,表现出了良好的特异性。结论:成功的制备了检测Cr3+和CL的荧光淬灭ICS,所制备的荧光淬灭ICS条具有检测信号和检测物浓度呈正相关,灵敏度高,成本低,操作简便的优点,可以作为一种快速有效的检测小分子的手段。