糖蛋白的脱糖基化反应是对糖蛋白的鉴定和分析的重要的方法之一,很多情况下,脱糖基化过程能够很好的对目标糖蛋白进行脱糖基化。然而,大多数传统的脱糖基化过程往往会对目标蛋白造成不可逆的变性。在本实验的研究中,我们改进了一种脱糖基化方法,通过利用可以耐受高浓度的二巯基苏糖醇(DTT)的酵母重组脱糖基化酶Png1p-ΔH1,能够使目标糖蛋白获得高效的脱糖基化,并且得到的蛋白部分能够保持其天然的构象与生化活性。我们应用核糖核酸酶B(RNase B)和酵母羧肽酶Y(CPY)作为目标糖蛋白来验证本实验的过程。结果证实,他们二者都可以在高浓度DTT条件下完全脱糖基化,而且当DTT被移除时能够完美的折叠回天然结构。圆二色谱(CD)光谱分析表明,经过脱糖基化的Rnase B和CPY能够恢复他们天然的构象。实验证明利用DTT参与的Png1p-ΔH1脱糖基化方法可以有效地释放N-连接糖蛋白中的糖链,获得目标糖蛋白质的天然、有生物活性的蛋白部分。