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研究背景与目的:糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病最常见及最严重的微血管并发症之一,已成为世界四种主要致盲性眼病之一,其基本的病理改变为毛细血管周细胞的消失,血-视网膜屏障受损和新生血管形成。DR的发病机制目前尚未完全阐明。一些研究表明其发展是多种因素和多种途径共同作用的结果。DR的发生和发展与糖尿病的病程及血糖控制水平有紧密联系,大部分糖尿病患者,尤其血糖水平控制欠佳、病程较长的患者易发生DR,但其发生和发展与糖尿病的病程及血糖控制水平并不是完全呈正相关关系。有研究显示约28.8％的糖尿病患者早期即可发生视网膜病变,但仍有大约22.2％的糖尿病患者,不管其血糖水平控制如何,都未发生视网膜病变。这表明遗传因素可能是糖尿病视网膜病变的始动因素。近年来随着分子生物学的快速发展,许多国内外学者已通过多项研究筛选出可能影响DR的候选基因,并着手从基因多态性及基因调控方面来分析遗传因素对DR的影响,VEGF基因就是众多候选基因中的一个。尽管这些研究已经取得了一定的进展,但目前尚未有统一的结论。
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)又称血管通透因子(vascular permeability factor,VPF),它可以与血管内皮细胞特异性结合,从而发挥生物学作用,使血管通透性增强,并能促进新生血管的形成。它在DR的发生和发展中起着及其重要的作用。VEGF基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)可能影响基因的转录和翻译,因而与多种疾病的发生发展有密切关系。关于VEGF基因单核苷酸多态性与DR的关系的研究已经有很多,但其结果并不完全相同,还存在很大的分歧,因此有必要对此继续进行深入的研究。VEGF基因启动子区、5-及3-非翻译区存在多个多态性位点,-1190G/A位点位于VEGF基因的启动子区,很可能会影响基因的表达水平,从而导致DR的发生。因此本文将采用聚合酶链-连接酶检测反应(PCR-LDR)对VEGF基因启动子区-1190G/A这一位点的多态性与中国石家庄地区汉族人群2型糖尿病视网膜病变的关系进行研究。
方法:本研究采用病例一对照的研究方法,共随机选取324例2型糖尿病患者作为研究对象,其中非增殖期视网膜病变患者(NPDR)124例,增殖期视网膜病变患者(PDR)56例,仅有糖尿病而无视网膜病变的患者144例作为对照组(Control组)。所有研究对象均为中国石家庄地区汉族人,各研究对象之间无亲缘关系。采取所有研究对象的外周静脉血5ml,用蛋白酶K消化一饱和氯化钠盐析法提取外周血白细胞DNA,并经PCR-LDR检测分析VEGF基因-1190G/A位点的基因型及等位基因分布频率。数据统计分析采用SPSS13.0版软件包(SPSS Company,Chicago,Illionis,USA)进行,P＜α=0.05认为有统计学意义。对计量资料进行正态性检验,符合正态性分布的资料以均数±标准差表示,非正态性分布资料以中位数(四分位数间距)表示。采用Hardy-Weinberg平衡分析法检验各组基因型频率的群体代表性。计量资料采用t检验;计数资料采用行×列表x2检验。以非条件Logistic回归分析计算相对风险度的比值比(odds ratio,OR)及95％可信区间(confidence interval,CI)。
结果:
1 NPDR组的收缩压与舒张压比Control组增高(P＜0.05);PDR组的空腹血糖、收缩压、舒张压及糖尿病病程比Control组均有所增高(P＜0.05)。PDR组空腹血糖、糖尿病病程经其余因素校正的OR95％CI分别为:2.306(1.150-4.625)、2.221(1.439-3.427)。
2 Control组、NPDR组、PDR组的VEGF基因-1190G/A位点均存在AA、AG、GG三种基因型,且其基因型频率分布经Hardy-Weinberg平衡分析符合群体基因遗传平衡(P＞0.05)。
3三组等位基因及基因型频率的比较结果:NPDR组与Control组相比,等位基因频率分布差异有统计学意义(x2=8.213,P=0.004＜0.05),两组相比G等位基因的OR95％CI=1.834(1.207-2.785)。PDR组与Control组相比,等位基因频率分布差异无统计学意义(x2=0.145,P=0.704＞0.05),两组相比G等位基因的OR95％CI=1.101(0.671-1.086)。NPDR组与Control组相比,基因型频率分布差异有统计学意义(x2=7.786,P=0.020＜0.05),与AA+AG基因型相比,经空腹血糖、收缩压、舒张压及糖尿病病程校正的GG基因型OR95％CI=1.950(1.155-3.293)。PDR.组与Control组相比,基因型频率分布差异无统计学意义(x2=0.134,P=0.935＞0.05),与AA+AG基因型相比,经空腹血糖、收缩压、舒张压及糖尿病病程校正的GG基因型OR95％CI=1.225(0.615-2.440)。
结论:
1在中国石家庄地区汉族2型糖尿病患者中,空腹血糖水平、糖尿病病程与PDR的发病风险呈正相关。
2在中国石家庄地区汉族2型糖尿病患者中,VEGF-1190G/A基因位点多态性与NPDR的发生有相关性,G等位基因是NPDR发生的易感基因。