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针对目前由于三唑类杀菌剂苯醚甲环唑的广泛应用所带来的农药残留问题,本文对苯醚甲环唑的免疫检测方法进行了研究,研究内容主要包括:苯醚甲环唑半抗原的设计及合成,完全抗原的制备,多克隆抗体的制备及纯化,免疫检测方法的建立及其性能指标的评价,以及高效液相色谱法的验证实验。本研究以3,4’-二氯二苯醚为原料,在自制离子液体的催化作用下与溴代乙酰氯反应合成中间体Ⅰ,然后中间体Ⅰ与4-氨基丁酸连接制备半抗原1(Hapten1)。采用中间体Ⅰ与三唑钠在异丁醇中反应合成中间体Ⅱ,被硼氢化钠还原后,在碘化钾的催化作用下与氯乙酸乙酯反应,水解后得到半抗原2(Hapten2)。将两种半抗原分别与BSA、KLH偶联制得4种免疫原,与HRP偶联制得2种酶标抗原,与OVA偶联制得2种包被原。用4种免疫原共免疫8只雄性新西兰大耳白兔,以制备多克隆抗体,其中以Hapten1-KLH免疫的N0.3兔子的抗血清效果最好,其效价为1:64000,对1000μg/L苯醚甲环唑标准品的抑制率高达86%,该抗体经纯化后浓度为2.12 mg/mL。抗体以0.50μg/well包板,酶标抗原Hapten1-HRP稀释3000倍,以0.5%脱脂乳粉进行封闭,样品稀释液为pH7.4的0.01 M PBS,建立了dc-ELISA检测方法,其灵敏度IC50为67.96±2.73 μg/L,检测限IC15为8.86±0.34 μg/L,与11种三唑类杀菌剂的交叉反应率均小于0.01%。选取10种果蔬类样品,经正己烷提取,PBS稀释后,进行加标回收实验,平均回收率为89.01%-103.43%,变异系数均小于14.33%,检出限为443 μg/kg。所建立的dc-ELISA检测结果与HPLC检测结果一致性良好,证明该方法准确度较高。包被原Hapten1-OVA以0.05 μg/well包板,抗体稀释2000倍,以0.5%脱脂乳粉进行封闭,样品稀释液为PH 7.4的0.01 M PBS,建立了ic-ELISA检测方法,其灵敏度IC50为29.10±1.43 μg/L,检测限IC15为4.58±0.45 μg/L,与11种三唑类杀菌剂的交叉反应率均小于0.01%。选取10种果蔬类样品,经正己烷提取,PBS稀释后,进行加标回收实验,平均回收率为89.70%-102.31%,变异系数小于均13.11%,检出限为229 μg/kg。所建立的ic-ELISA检测结果与HPLC检测结果一致性良好,证明该方法准确度较高。