猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）属于冠状病毒科,是1种单股正链RNA病毒。TGEV感染给世界各地养猪业造成了巨大的经济损失。Pals1是1种紧密连接相关蛋白,是CRB3-Pals1-Patj极性复合物的一员,这些蛋白对于形成细胞连接和建立顶端-基底极性是必不可少的。一方面,紧密连接能使上皮细胞形成物理屏障,在肠道抗病毒天然免疫反应中发挥着重要作用。另一方面,病毒又进化出降解紧密连接蛋白以促进自我复制的能力。紧密连接蛋白Pals1是否在TGEV复制过程中发挥作用目前尚无研究报道,因此有必要对Pals1蛋白对TGEV复制的影响进行系统的研究。为了研究Pals1在病毒感染中发挥的作用,本实验首先在猪源细胞上扩增并测定了Pals1基因序列,同时构建了p CMV-myc-Pals1真核表达质粒,并鉴定其在猪源细胞上可高效表达。本研究发现在细胞中过表达Pals1蛋白能抑制TGEV的复制,而下调细胞中Pals1的表达促进病毒的复制。研究结果表明宿主细胞Pals1能抑制TGEV的复制。为了研究TGEV感染对Pals1的影响,本实验首先利用Western Blot实验证明了在TGEV感染后,Pals1出现下调表达,并且呈现时间和剂量依赖性。利用荧光定量技术证明TGEV感染不影响Pals1的m RNA水平,只在蛋白水平上降解Pals1。通过进一步的药物抑制实验,本研究观察到TGEV感染下调Pals1的表达是通过泛素-蛋白酶体途径。随后,本实验又利用荧光显微镜观察到在TGEV感染后,Pals1的亚细胞定位发生改变,从细胞膜连接处重新分布到细胞核。研究表明病毒感染与宿主细胞Pals1蛋白之间存在相互拮抗作用。为了进一步研究病毒感染与宿主细胞Pals1之间的相互作用,本实验利用质谱分析技术鉴定与宿主细胞Pals1蛋白相互作用的病毒蛋白。研究结果初步表明在病毒感染的细胞中,病毒M蛋白与Pals1可能存在相互作用。为了进一步确认这一相互作用,本研究采用了免疫共沉淀技术,发现在病毒感染的细胞中,应用Pals1的商品化单克隆抗体,Pals1能免疫沉淀TGEV M蛋白。反之,应用M蛋白的单克隆抗体,TGEV M蛋白也能免疫沉淀Pals1。研究结果表明在病毒感染的细胞中,病毒M蛋白与Pals1存在内源性相互作用。综上所述,本研究发现一方面宿主蛋白Pals1能抑制TGEV的复制,另一方面TGEV感染可以降解Pals1,并改变Pals1的亚细胞分布,本研究首次发现Pals1是阻碍TGEV病毒感染的限制因子。此外,在病毒感染的细胞中,病毒M蛋白与Pals1存在内源性相互作用,这一相互作用可能在Pals1蛋白抗病毒过程中发挥一定的效应。本研究的实验结果将为TGEV的抗病毒药物筛选提供新的靶点。