苍蝇抗菌肽SK84的表达纯化及其结构和功能的初步研究

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抗菌肽是生物体自身产生的具有抑杀微生物效果的活性肽,两亲性的α螺旋结构为其发挥抗菌作用提供了重要基础。与抗生素相比,抗菌肽抗菌谱广、不易引发耐药性,因而有望被开发为抗微生物感染的新型药物。  SK84是陆婕博士于2006年从蝇蛆中鉴定的一种新型抗菌肽,研究发现,SK84能裂解细胞膜,对部分革兰氏阳性菌如枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等有杀伤作用,并且能够抑制肝癌细胞HepG2、乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231等的增殖。  SK84在天然产物中含量很少,分离纯化困难,而化学合成成本较高,因而限制了对其功能与作用机制的研究。本课题建立了一种新的SK84生产方法,并对获得的蛋白进行了功能和结构的初步研究,主要结果如下:  1)构建了重组质粒pET-32a(+)-SK84-His6,并在大肠杆菌中获得成功表达。  2)优化了诱导表达条件,最佳条件为:初始菌液OD值,1.0;IPTG浓度,1.0mM;温度,30℃;诱导时间,4h。  3)活性研究发现,表达的SK84对枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌有一定的抑制作用,并促进HepG2细胞的凋亡。  4)检测了重组表达蛋白SK84-His6的二级结构,发现SK84-His6可以形成两亲性的α螺旋结构。  综上所述,通过原核表达可以获得具有一定活性的高纯度的SK84蛋白,此方法提供了一种新的SK84获取途径,为今后的进一步研究奠定了良好基础。此外,结构分析的结果提示,SK84可能通过两亲性的α螺旋结构发挥抗菌作用。
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