论文部分内容阅读
在胚胎着床过程中,母体复杂的免疫应答和免疫调节的结果是母体对胚胎这种半同种异体产生免疫耐受。辅助性T细胞和凋亡细胞在母—胎界面起到了核心调控作用,Th1、Th2型免疫效应在子宫局部分别降调节和升调节,有利于胚胎成功着床。孕酮和保胎中药都有对抗孕酮拮抗剂米非司酮的作用,在临床上被广泛应用。本课题主要探讨细胞因子及细胞凋亡在胚胎着床过程中的免疫学机理,为有效预防早期胚胎丢失提供理论依据。在妊娠第4天第一组注射生理盐水作对照,第二组使用米非司酮促流产,第三组使用米非司酮的同时注射外源性孕酮阻断其作用,第四、五、六组在使用米非司酮的同时分别灌服和饲喂中药方剂1、方剂2、方剂3,希望通过调节全身免疫状态,达到保胎的目的。分别在0h、12h、24h、36h剖杀小鼠,取右侧子宫组织匀浆,用ELISA(酶联免疫吸附试验)法检测子宫匀浆液中Th1型细胞因子的代表IL-2、IFN-γ和Th2型细胞因子的代表IL-4、IL-10的含量;取左侧子宫组织用波恩液固定,原位末端标记(TUNEL)法进行细胞凋亡的组织形态学检测,免疫组织化学法测定Bcl-2和Bax蛋白在子宫组织中的分布情况。正常妊娠的胚胎着床期子宫局部,表达一定量的Th2型细胞因子如IL-4、IL-10,在第4.5天时的浓度分别为11.60pg/mg、21.33pg/mg;同时也表达一定量的Th1型细胞因子如IL-2、IFN-γ,第4.5天时的浓度分别为50.03pg/mg、564.67pg/mg。同时以着床点为中心,绒毛和蜕膜组织中都存在少量凋亡细胞,并检测到Bcl-2、Bax蛋白的适量表达。米非司酮促流产后,Th1型细胞因子的表达明显升高,与对照组相比差异极显著,Th2型细胞因子含量仅在用药12h后有显著下降,但很快升高到正常水平;用药后滋养细胞和蜕膜细胞的凋亡明显增加,Bax蛋白的表达也增强。孕酮能显著阻断米非司酮的作用,保持IL-2、IFN-γ的含量不致过高,但可能不是通过升高IL-4,IL-10的含量促进胚胎着床。使用中药方剂组,在用药12h后,IL-2、IFN-γ的含量显著下降(P<0.01),但在24h、36h后,逐渐与对照组接近,在36h时表现差异不显著;与孕酮维持胚胎着床机制不同的是,中药方剂组均能提升IL-4,IL-10的含量,并能使之维持在较高的水平,与各组相比,差异均显著。正常胚胎着床子宫免疫微环境以Th2型反应为主,局部Th1型反应、细胞凋亡增强,则诱导早期胚胎丢失。适量孕酮可抑制Th1型免疫效应的过度表达,对于保证胚胎着床是必需的。米非司酮可与蜕膜处孕酮受体结合,阻断孕酮的免疫抑制,从而打破母—胎界面Th1/Th2型免疫反应平衡,局部细胞凋亡加强,导致流产。保胎中药方剂不仅能抑制Th1型细胞因子的过度表达,还能提升Th2型细胞因子的含量,使子宫局部Th2/Th1的比值升高,但对细胞凋亡影响并不明显,这可能是其促进胚胎着床的免疫学机制。