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糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病(diabetes mellitus, DM)最为常见而严重的微血管并发症之一。DM人群的DN发生率为20%～40%,是患者的主要死因之一。其主要特征是尿蛋白增加和肾小球硬化。微循环是指微血管即微动脉和微静脉之间的血液循环,是血液与组织细胞进行物质交换的场所。微循环血流不畅指微循环血流流速、血管形态和功能异常。微循环障碍与糖尿病肾病的发生发展有密切的关系。DN微血管病变时,其血栓素增高,血小板功能亢进,血管收缩,血小板聚集,血液高凝,血流缓慢,以致血流在血管内中断,肾脏的氧气、养料等不能得到有效运输,无法传递能量,排除废物,导致DN病情加重,最终发展为终末期肾病。双清的主要成分为决明子、黄精、桑叶、菊花、葛根、山药、芦根等。其中的多味中药均具有显著的活血化瘀的作用,可有效软化血管、改善微循环,预防和治疗糖尿病微循环障碍的发生。本实验第一部分采用单侧肾脏切除加链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病大鼠模型,通过灌胃给药治疗,以期证明双清对早期糖尿病肾病的作用;第二部分通过观察小鼠给药后耳廓细血管口径以及血流速度等的改变,证明双清对小鼠耳廓微循环的影响。第一部分双清对早期糖尿病肾病作用的研究目的:观察双清对早期糖尿病肾病大鼠血糖升高和肾脏损伤的防治作用。方法:选取健康雄性Wistar大鼠80只,体重220±20g,除11只作为正常对照组,其余各只大鼠常规消毒,1%戊巴比妥钠麻醉后,行左侧肾脏切除术,切除后每只给予1ml注射用青霉素钠防止感染。两周后,切除肾脏的大鼠空腹12h后,按50mg/kg腹腔注射1%STZ枸橼酸缓冲溶液。3天后大鼠空腹12h眼眶取血测血糖,血糖值≥11.1mmol/L作为糖尿病成模大鼠,其余建模不成功者予以剔除。成模大鼠分为5组:阳性对照组灌胃8mg/kg缬沙坦+1mg/kg格列本脲,双清高(SQ-H)、中(SQ-M)、低(SQ-L)组分别灌胃4g/kg、2g/kg、1g/kg双清,模型对照组以蒸馏水灌胃。正常对照组亦灌胃给予蒸馏水。各组均按1ml/100g给药。每日灌胃给药一次,连续给药4周,正常进食饮水。结果:1大鼠状态及体重变化:模型对照组大鼠明显消瘦,多饮、多食、多尿,具有典型的“三多一少”表现;大鼠精神萎靡,反应迟钝,蜷卧拱背,毛发无光泽。阳性对照组和双清组大鼠也有类似情况,随着给药时间增加,状态略有好转。正常对照组大鼠状态良好。实验开始时,各组随机分配,体重均无显著性差异;实验结束时,正常组(321±23)、阳性药组(298±49)和双清高剂量组(279±46)体重均明显高于模型组(225±37)(P<0.05)。2血糖变化:给药4周后,模型对照组血糖值(35.2±10.9)显著高于正常对照组(4.3±0.7, P<0.05),双清高、中、低剂量组血糖值分别为16.3±5.4、17.0±9.6、19.2±7.8,阳性对照组血糖值为6.5±2.2,与模型对照组比较均明显降低(P<0.05)。3肾脏指标:给药4周后,模型对照组(0.64±0.07)的肾体比明显高于正常对照组(0.25±0.04, P<0.05),与阳性对照组(0.46±0.09)和双清高剂量组(0.51±0.06)的肾体比比较也明显偏高(P<0.05);模型组大鼠的24h尿蛋白(227±47)含量与正常对照组(32±12)比较有显著性差异(P<0.05),也明显高于阳性药组(31±12)和双清高(120±47)、中(83±63)剂量组的大鼠24h尿蛋白(P<0.05);血清中,模型对照组(12.0±2.1)的尿素氮(BUN)高于正常对照组(6.0±2.1, P<0.05),也高于阳性对照组(7.7±1.4)的BUN(P<0.05)。4病理切片:病理切片显示,模型对照组肾小球增大,肾小管上皮细胞水肿严重,肾间质充血。阳性对照组与模型组比较肾小球较小、形态规则,肾小管上皮细胞水肿不明显,肾间质充血也较轻;正常对照组肾小球未见增大,无水肿、充血等现象。双清中、高剂量组各项指标与模型组比较明显改善,双清低剂量组作用不明显,与模型组接近。结论:给药4周后,双清对早期糖尿病肾病大鼠血糖有降低作用;对其肾脏具有保护作用,且呈剂量依赖性。第二部分双清对小鼠耳廓微循环的作用目的:观察双清对小鼠耳廓血管的扩张作用,以及对血流速度等的影响。方法:将昆明小鼠分为5组,每组8只,正常对照组给予生理盐水,阳性对照组给予50mg/kg复方丹参片水溶液。双清高、中、低组分别给予6.4g/kg、3.2g/kg、1.6g/kg双清水溶药液,各组均按0.2ml/10g腹腔注射给药。1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,用医用橡皮膏贴在小鼠耳廓上去毛,将小鼠腹部向下固定在小鼠观察台上,耳廓表面滴加少许液体石蜡。各组分别腹腔注射生理盐水、复方丹参或双清水溶液,微循环显微镜观察注射前后同一部位耳廓微循环微动脉(A)、微静脉(V)口径,流速变化。拍照记录给药前(0min)及给药后10、20、30min时耳廓微循环微动脉、微静脉图像,并用医学影像处理系统测量血管口径,比较给药前后以及各组间差异。结果:1微静脉口径变化:正常对照组微静脉各时间点口径与0min比较均无显著性差异。阳性对照组微静脉口径10min(50.81)时与0min(48.44)比较明显扩张(P<0.05),20min(50.69)和30min(50.44)时与0min比较扩张极明显(P<0.01)。双清低剂量组微静脉各时间点口径与0min比较均无显著性差异。双清中剂量组微静脉10min(53.61)、20min(54.00)、30min(53.44)口径与0min(50.50)比较均有明显扩张(P<0.05)。双清高剂量组微静脉10min(59.00)和20min(59.21)口径与0min(56.36)比较均明显扩张(P<0.05),30min与0min比较无显著性差异。2微动脉口径变化:正常对照组微动脉各时间点口径与0min比较均无显著性差异。阳性对照组微动脉口径10min(30.00)时与0min(27.69)比较明显扩张(P<0.05),20min(31.50)和30min(32.00)时与0min比较扩张极明显(P<0.01)。双清低剂量组微动脉各时间点口径与0min比较均无显著性差异。双清中剂量组微动脉10min(24.67)和20mi(n24.94)口径与0min(21.11)比较明显扩张(P<0.05),30min(25.89)与0min比较有极显著性差异(P<0.01)。双清高剂量组微动脉10min口径与0min比较无显著性差异,20min(35.50)和30min(35.57)口径与0min(32.50)比较有显著性差异(P<0.05)。3血流变化:给予生理盐水和低剂量双清后,小鼠耳廓微动脉、微静脉血流流速无明显变化;毛细血管开放数目也没有明显增多。给予双清中、高剂量和阳性对照药后,可见半小时内小鼠耳廓微动脉、微静脉中血流速度变快,血管均逐渐充盈,可以观察到的毛细血管数目变多。结论:双清对小鼠耳廓血管有扩张作用,且呈剂量依赖性。