鸟嘌呤核苷分子印迹固相萃取柱研究

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分子印迹技术(MIT)是一种人工合成的具有分子识别功能的新技术,分子印迹聚合物(MIP)能够识别模板分子及其结构相似物。与天然识别系统相比,MIP具有稳定性能好和可重复利用等优点。因此,MIP已经被广泛应用于色谱分离、固相萃取(SPE)及化学仿生传感器等诸多领域。8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)是一种DNA氧化损伤的重要标己物,可作为肿瘤标记物用于临床诊断。因此研制以鸟嘌呤核苷为模板的分子印迹固相萃取柱具有重大而现实的意义。本论文以α-甲基丙烯酸为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂,十二烷醇和二甲基亚砜(DMSO)为致孔剂和溶剂,偶氮异地丁腈(AIBN)为引发剂在热引发条件下合成了以鸟嘌呤核苷为模板的分子印迹聚合物,并对聚合反应条件进行了讨论。结果表明,聚合条件对印迹聚合物的吸附性能有很大影响,最后选定的合成条件为:单体质量为71.9 mg,模板为78.8 mg,且致孔剂为1.82 mL,溶剂为 2.32 mL。进而采用平衡吸附法对印迹聚合物的吸附性能进行了研究。吸附动力学表明振荡12 h即可达到吸附平衡。吸附等温线表明,此MIP拟合双朗缪尔吸附模型(Bi-Langmuir),得到两组结合位点参数,分别是高亲和力位点(KD1=0.034 μg/mL,Bmax1=0.585 μg/mg)和低亲和力位点(KD2=2.718μg/mL,Bmax2=0.059μg/mg)。最后用印迹聚合物作为固相萃取柱的填料,讨论了活化试剂和淋洗试剂对萃取效率的影响,用乙腈和水作为活化试剂,然后用水作为淋洗溶剂,萃取效果良好。通过选择性实验表明鸟嘌呤核苷及其结构相似物2-脱氧鸟嘌呤核苷能够有效地被选择性富集。
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