目的:课题组前期以大黄酸为先导化合物,利用Schlenk技术,设计合成了新型大黄酸衍生物4a,该化合物最大特点是致使卵巢癌细胞的内质网和线粒体发生肿胀并产生大量空泡,但作用机制不清。本研究主要探讨新型大黄酸衍生物4a诱导卵巢癌细胞非凋亡程序性死亡与抑制浸润转移的作用机制。方法:1.利用多功能酶标仪及紫外分光度光度计检测大黄酸衍生物4a的吸收光谱和发射光谱;HE染色观察检测大黄酸衍生物4a作用卵巢癌细胞后的细胞形态变化;CCK8法检测不同浓度的大黄酸衍生物4a对卵巢癌细胞的增殖的影响;流式细胞仪检测大黄酸衍生物4a对卵巢癌细胞周期的影响。2.大黄酸衍生物4a引起卵巢癌细胞的超微结构的变化采用透射电镜观察;激光共聚焦ER-tracker荧光染料确定细胞内空泡的来源;流式细胞仪检测细胞凋亡的情况;采用m RFP–GFP-LC3慢病毒感染卵巢癌细胞并监测受试细胞的自噬流变化。Western blot检测凋亡相关蛋白（caspase3、caspase9以及PARP）,检测内质网应激相关蛋白（Bip、PERK、IRE1、ATF6、p-eif2α、ATF4等）MAPK相关蛋白（JNK、P38、ERK及p-JNK、p-P38、p-ERK）表达。3.采用Transwell法检测细胞的侵袭能力;划痕检测细胞的迁移能力;免疫荧光检测大黄酸衍生物4a对细胞微丝的影响;Western blot检测EMT的标志性蛋白（Vimentin、β-cantenin、E-caderin）、基质金属蛋白酶（MMP2、MMP9）及RAC1蛋白的表达情况。结果:1.大黄酸衍生物4a最大吸收波长为380nm,发射光最大波长为520nm,激发光最大波长为400-450nm,能明显抑制卵巢癌SKOV3和SKOV3-PM4细胞的增殖,半数抑制率IC50分别是（5.79±1.81）μmol/L、（4.56±3.99）μmol/L。大黄酸衍生物4a可以阻滞卵巢癌细胞于G2/M期。在HE染色镜下可见,大黄酸衍生物4a可以诱导卵巢癌细胞产生大量空泡。2.电镜结果显示大黄酸衍生物4a作用卵巢癌SKOV3、SKOV3-PM4细胞后,胞质内可见大量的边界清晰的空泡,内质网严重肿胀,线粒体损伤伴嵴断裂,细胞膜仍完整,未见凋亡小体和自噬溶酶体。激光共聚焦结果显示胞质内的空泡被ER-tracker染料所特异性标记。大黄酸衍生物4a对卵巢癌细胞凋亡率无明显影响。Western Blot结果表明与凋亡诱导剂顺铂组相比,大黄酸衍生物4a处理组的凋亡蛋白caspase3,caspase9,PARP均未出现剪切型。SKOV3与SKOV3-PM4细胞中的P62、LC3II的蛋白表达增加,而LC3I表达降低。与自噬诱导剂雷帕霉素比较,大黄酸衍生物4a作用于自噬双标慢病毒（m RFP–GFP-LC3）转染的卵巢癌细胞24h后,观察到细胞内的绿色的荧光点较多,红色的荧光点较少。这提示自噬溶酶体较少,自噬流不通畅。Western Blot结果显示衍生物4a上调了卵巢癌细胞的内质网应激标志蛋白BIP78表达,并激活了PERK-p-EIF2α-ATF4内质网应激信号通路。同时,衍生物4a下调了旁凋亡抑制蛋白Alix,激活了MAPK激酶的ERK、JNK和P38的磷酸化,从而诱导细胞发生旁凋亡样死亡。3.细胞的划痕实验显示大黄酸衍生物4a处理组明显抑制细胞的划痕愈合率,并呈现剂量和时间依赖性。Transwell实验表明衍生物4a比先导化合物Rhein具有更强的抑制卵巢癌细胞的侵袭能力。F-actin染色观察大黄酸衍生物4a作用的卵巢癌细胞微丝断裂,骨架重排,胞质空泡化。发现衍生物4a处理SKOV3、SKOV3-PM4细胞24 h后,Rac1蛋白表达下降（P<0.05）,细胞EMT的标志蛋白E-caderin蛋白表达升高（P<0.05）,Vimentin、β-cantenin蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）,抑制卵巢癌细胞EMT过程,同时基质金属蛋白酶MMP2、MMP9表达水平与空白组相比也明显降低（P<0.05）。结论:1.大黄酸衍生物4a能显著抑制卵巢癌细胞的增殖。2.大黄酸衍生物4a可引起卵巢癌细胞线粒体损伤、内质网肿胀,导致未折叠蛋白或错误蛋白的积累,细胞内产生大量空泡。通过激活PERK-p-EIF2α-ATF4内质网应激信号通路,致使MAPK激酶的ERK、JNK和P38的磷酸化,最终诱导卵巢癌细胞发生非凋亡依赖的程序性死亡模式-旁凋亡。3.大黄酸衍生物4a能抑制卵巢癌细胞迁移及侵袭,其机制可能是下调Rac1蛋白表达,抑制基质金属蛋白酶分泌,诱导细胞骨架重排,上调EMT过程关键分子E-caderin和下调Vimentin、β-cantenin的表达综合作用的结果。