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目的:人表皮生长因子受体2(HER2)状态既是乳腺癌独立的预后因素,也是靶向治疗疗效的预测指标,因此准确检测HER2蛋白表达和/或基因扩增至关重要。根据2013版美国临床肿瘤学会(ASCO)和美国病理医师学院(CAP)乳腺癌HER2检测指南的建议,当HER2免疫组织化学(IHC)检测结果为2+并且荧光原位杂交(FISH)检测结果为不确定(HER2/CEP17比值<2.0,且平均HER2拷贝数/细胞≥4.0但<6.0)时,推荐选取同一肿瘤的另一个蜡块进行重新检测。本研究的目的是探索同一肿瘤的两个不同蜡块之间HER2状态的一致性。方法:我们回顾性分析了 2015年4月至2019年1月间存档于北京协和医院的5685例原发性浸润性乳腺癌标本。通过FISH法复测首检中HER2双不确定病例(IHC 2+且FISH结果为不确定)的同一肿瘤另一蜡块中HER2基因状态。根据2013版ASCO/CAP乳腺癌HER2检测指南判读FISH结果。结果:在纳入本研究的5685例样本中HER2 IHC3+、2+、1+、0分别占20.5%、31.8%、28.3%、19.5%。其中,1777例IHC 2+标本,以FISH法检测HER2基因状态的结果显示,HER2基因扩增、未扩增、不确定率分别占13.7%、66.3%、20.0%。随后,以FISH法复测了333例HER2双不确定样本的同一肿瘤之另一蜡块的HER2状态,HER2阳性、阴性及不确定率分别为5.7%、22.5%和71.8%。按照2018版ASCO/CAP乳腺癌HER2检测指南,若将HER2双不确定的病例直接判读为HER2阴性,则以另一蜡块复测HER2双不确定标本以后仅较之前增加了1.3%(19/1511)的HER2阳性病例,即HER2阳性和阴性率分别为5.7%和94.3%。结论:1、按照2013版ASCO/CAP乳腺癌HER2检测指南,在原发性浸润性乳腺癌中,HER2双不确定标本的同一肿瘤不同蜡块之间HER2状态不一致率达28.2%;2、按照2018版ASCO/CAP乳腺癌HER2检测指南,对于HER2结果为双不确定的病例来说,源于同一肿瘤的不同蜡块之HER2状态高度一致(94.3%);3、对于因两版指南的不同判读法则而导致差异的这部分病例的精准归类及其生物学意义尚待深入探索;尽管新版指南更具成本效益,但前瞻性相关研究数据的充分积累仍是有必要的。目的:准确阐明HER2状态是评估乳腺癌预后进展和预测抗HER2治疗效果的重要前提。我们的目的是通过RNA原位杂交分析(RNAscope)揭示HER2 mRNA的表达情况,协助识别这组有争议的乳腺癌亚组病人:HER2 IHC 2+、HER2/CEP17≥2.0且平均HER2基因拷贝数/细胞<4.0(更新的2018版ASCO/CAP乳腺癌HER2检测指南命名为FISH第2组)的HER2状态。并且,进一步探索此组患者与预后相关的多基因表达状况。方法:回顾性分析8983例浸润性乳腺癌标本,所有标本首先均经IHC法检测HER2蛋白表达,随后对IHC 2+标本再采用FISH法进行检测,以确认其HER2状态。针对所筛选出的41例IHC 2+且FISH第2组标本,以RNAscope法分析其HER2 mRNA表达水平。进而,对其中36例标本又以Nanostring nCounter法分析了 50个乳腺癌相关基因的mRNA表达谱,并通过多色荧光免疫组化法(Opal IHC)验证了部分具有基因转录本高拷贝数的标本之蛋白表达。结果:在本项单中心研究中,HER2 IHC 2+且FISH第2组的浸润性乳腺癌发病率为0.46%(41/8983);其大多数标本(27/41,65.9%)的HER2 mRNA表达水平较低(RNAscope评分1和2),只有1例(1/41,2.4%)HER2 mRNA高水平表达(RNAscope 4分),FISH HER2/CEP17=2.06,平均HER2拷贝数为3.70。其中,1例FISH HER2/CEP17比值最高者为3.90,HER2 mRNA表达水平最低(RNAscope 1分)。2例平均HER2拷贝数/细胞最高(3.95)的病例其RNAscope评分分别为3分和2分。在我们的标本中没有发现RNAscope评分为0的病例。在大多数病例中(35/41,85.4%),17号染色体为亚二体性(平均CEP17信号/细胞≤1.75)。HER2 mRNA表达与FISH结果(平均HER2基因拷贝数/细胞、平均CEP17拷贝数/细胞或HER2/CEP17比值)和临床病理特征(ER和PR状态,Ki67指数,肿瘤大小和淋巴结转移)没有显著相关性。多基因分析结果显示,80%以上的标本其FOXA1、CXXC5、MDM2和MMP11基因的mRNA表达居于高表达的10位基因之列;其中,经蛋白表达验证,83.3%(30/36)的标本具有MDM2过表达(H-score≥1)。结论:HER2 mRNA过表达不是此组患者的主要特征;通过多基因表达分析发现该组患者中一些基因具有高表达的特征,这可能有助于我们了解这个亚群;MDM2的过表达可能使这些患者成为MDM2抑制剂的潜在获益者。