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目的：依据中医扶正祛邪的治疗原则，结合中医基础理论，采用现代分子生物学技术，研究中药复方肠胃清诱导胃癌MKN45细胞凋亡的作用，从MAPKs信号通路与p53蛋白表达的角度，探讨中药复方诱导胃癌细胞凋亡的作用机理；同时，应用中药复方肠胃清联合5-Fu，观察其对5-Fu的增效减毒作用，为中药复方肠胃清的临床应用，为胃癌的中西医结合临床治疗提供理论及实验依据。 方法： 1.采用MTT、细胞克隆形成实验、流式细胞术及Hoechst3258染色法分别观察了中药复方肠胃清对人胃癌MKN45细胞生物学活性及凋亡的影响； 2.采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(Westernblot)分析，QRT-PCR方法观察了肠胃清对MKN45细胞中MAPKs信号通路转导、p53及相关凋亡基因表达的影响； 3.通过构建p53蛋白高表达的pEGFP-N1-TP53-GFP目的质粒，采用HilyMax转染试剂瞬转的方法，高表达p53基因，利用免疫印迹方法检测了肠胃清诱导的MAPKs信号转导同p53基因的相关性； 4.采用皮下接种的方法，构建裸鼠人胃癌MKN45异位移植瘤模型，建立模型后，随机分为6组：A生理盐水组；B肠胃清低剂量组；C肠胃清中剂量组；D肠胃清高剂量组；E5-FU组；F肠胃清联合5-FU组。治疗4周后处死各组老鼠，观察瘤体大小并计算肿瘤生长抑制率，观察肠胃清对肿瘤的抑制作用及对5-FU的增效作用，明确中药复方肠胃清联合化疗药对裸鼠异位瘤的治疗作用，进一步明确肠胃清抑制肿瘤生长的作用机制。 结果： MTT结果显示，不同浓度肠胃清药物血清作用MKN45细胞48h后，细胞呈现不同的抑制作用，同对照组比较有统计学差异，尤其是10％和20％浓度组最为显著；5-Fu能抑制MKN45细胞的增殖活性，具有一定的剂量依赖性，其IC50=25.34μg/mL。细胞克隆形成试验和AnnexinV流式细胞术结果显示，肠胃清能抑制人胃癌MKN45细胞的增殖，促进MKN45细胞的凋亡，且具有剂量依赖性；肠胃清联合5-Fu时，可显著增强5-Fu对MKN45细胞凋亡的促进，与中药组及5-Fu组比较有统计学差异(P<0.05)。 QRT-PCR结果显示：肠胃清可以上调p53mRNA表达，组间比较有统计学意义(P<0.05)，但是同空白对照组比较无统计学差异(P>0.05)；同时还可上调促凋亡基因BaxmRNA水平，下调抗凋亡基因Bcl-2mRNA表达，组间比较均有统计学差异(P<0.05)。 Westernblot结果显示：正常培养的MKN45细胞中ERK1/2、JNK1/2和p38MAPK总蛋白表达及其磷酸化均有不同程度的表达。当加入10％浓度的肠胃清药物血清30min后，ERK磷酸化受到抑制，约4h达到峰值，后维持在较低水平；而总ERK表达在1小时是表达增加，2h时表达最强，4h后开始逐渐减弱，总体趋向于下调。p38MAPK在肠胃清作用30min时磷酸化增强，随着肠胃清作用时间的延长，其磷酸化逐渐增强，12h出现峰值，24h时磷酸化减弱，总p38MAPK表达趋于与磷酸化基本一致。JNK在肠胃清作用1h时被激活，随着肠胃清作用时间的延长，其磷酸化逐渐增强，呈现出一定的时间依赖性，在此过程中，总JNK表达趋于下降。肠胃清能够以时间及剂量依赖性的方式激活MKN45细胞中MAPKs信号肠胃清可以通过调控ERK1/2和JNK1/2信号通路，而非p38MAPK信号，增加p53蛋白的表达，从而增强其对MKN45细胞凋亡的调控作用；MAPKs抑制剂能够显著上调p53蛋白表达。高表达p53基因可以抑制ERK1/2磷酸化，激活JNK1/2的磷酸化，证明MAPKs信号通路与p53存在交互作用。 肠胃清能抑制裸鼠异位瘤的生长，呈现一定的剂量依赖性。肠胃清可以抑制ERK1/2的激活，增加JNK、p38MAPK在裸鼠异位瘤组织中表达。肠胃清联合5-Fu治疗裸鼠皮下异位瘤，能够增强5-Fu对肿瘤的抑制作用，与模型组和低剂量组比较具有统计学差异(P<0.05)；肠胃清联合5-Fu治疗裸鼠皮下异位瘤，能够增强p53、总JNK、p38MAPK及其磷酸化在组织中表达，同模型组及低剂量组比较均有统计学差异(P<0.05)。 结论： 1.中药复方肠胃清药物可以抑制MKN45细胞增殖活性，具有一定的剂量依赖性。能使MKN45细胞阻滞在G1期；肠胃清联合5-Fu，能增强5-Fu对MKN45细胞的抑制作用，促进5-FU对MKN45细胞的凋亡诱导作用。 2.肠胃清可以通过调控促凋亡基因p53、Bax，抗凋亡基因Bcl-2在mRNA和蛋白表达水平，增强caspase-3、PARP的活性，诱导胃癌MKN45细胞的凋亡。肠胃清联合5-FU，能促进5-Fu对促凋亡基因p53、Bax及抑制抗凋亡基因Bcl-2mRNA表达的调节。 3.肠胃清通过调控MAPKs信号通路，从而介导MKN45细胞凋亡的过程，具有一定的时间和剂量依赖性；肠胃清可能通过调控ERK1/2和JNK1/2信号通路，而非p38MAPK信号的激活，增加p53蛋白的表达，增强caspase-3、PARP的活性，从而诱导MKN45细胞凋亡； 4.肠胃清能抑制裸鼠异位瘤的生长，可以明显抑制ERK1/2的激活，增加p53及JNK、p38MAPK在异位瘤组织中的表达，且具有一定的剂量依赖性，这可能是其调控胃癌MKN45细胞的机制之一；肠胃清联合5-Fu治疗裸鼠皮下异位瘤，可以增强5-Fu对肿瘤的抑制作用；可能通过对MAPKs信号通路的调控作用，增加p53在肿瘤组织中表达，增强5-Fu诱导胃癌细胞凋亡。