环状RNA cFUT8在肝癌中的表达及其与预后关系的研究

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目的探讨环状RNAcFUT8在原发性肝细胞癌组织中的表达水平及其对预后的影响。方法1、收集217例HCC患者的癌组织及配对的瘤旁正常组织标本,采用Arraystar人类环状RNA芯片对随机选择的3对HCC临床标本进行筛选,筛选标准为| log2(FC)|>1、P<0.05,选出最显著差异性上调的环状RNA,进行QRT-PCR验证。2、通过qRT-PCR测定cFUT8在肝癌组织的表达水平,明确cFUT8与临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier法分析cFUT8表达与患者生存时间的关系,采用log-rank(Mantel-Cox)检验分析组间差异。3、使用 qRT-PCR 验证 Hep3B,97L,PLC,HLE,Huh7 和 HepG2 等 6 个肝癌细胞系和肝正常细胞系L02中的cFUT8表达水平。Transwell侵袭实验验证各细胞系侵袭能力,探讨二者相关性。4、构建cFUT8过表达载体和空白载体,分别转染到肝癌Huh7和HepG2细胞系中后观察细胞形态。5、使用3种siRNA特异性敲低Huh7和HepG2细胞系中cFUT8,通过qRT-PCR再次验证cFUT8敲低效率。选出敲低效率最显著的一组再次进行Transwell侵袭实验检测侵袭能力,以及进行动物实验观察敲低cFUT8后对肝癌细胞在体内的转移、增殖能力的影响。结果1、通过Arraystar circRNA芯片,筛选出肝癌样本中符合条件的环状RNA有127个(上调113个,下调14个),其中hascircRNA101368(cFUT8)表达量显著上调约11.44倍(FC=11.44)。随后在57对癌组织/正常组织中验证肝癌组织中的cFUT8表达水平明显增高(P<0.01)。2、cFUT8的表达水平与肝癌的临床分期(P<0.001)、病理分级(P<0.001)和淋巴结浸润有关(P<0.005)。Kaplan-Meier生存曲线提示cFUT8表达水平与HCC患者的总生存率(P=0.0023)和无病生存率(P=0.0057)成负相关。3、与肝正常细胞系 L02 相比,cFUT8 在 Hep3B,97L,PLC,HLE,Huh7 和 HepG2等6个HCC细胞系中显著上调,同时cFUT8的表达水平与体外侵袭能力成正相关。4、cFUT8过表达时,Huh7和HepG2细胞显示间充质形态,而对照细胞则表现出上皮形态。5、与对照组相比,敲除cFUT8则显著抑制Huh7和HepG2细胞的侵袭活性(P<0.01),同时NOD-SCID小鼠肝脏转移性结节明显减少,皮下移植瘤体积显著缩小(P<0.01))。结论cFUT8在肝癌组织中高表达,使得肿瘤侵袭、转移、增殖能力增强,与肝癌不良预后相关,可为肝癌的治疗和诊断提供新视角。
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