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背景:胃癌(Gastric cancer,GC)是世界范围内高发恶性肿瘤之一,确诊时通常已为中晚期。目前,胃镜检查是诊断GC的标准检查方法,安全性高,但为侵入性检查,对于部分人群较难以接受。目前临床上已有一些肿瘤标志物用于胃癌的筛查,但敏感性和特异性有待提高,因此,临床需要一些非侵入性、低成本的生物标志物作为胃癌的早期检查方法。Micro RNAs(micro RNAs,miRNAs)是一类内源性非编码RNAs,转录后通过降解靶m RNAs或阻断其翻译来调节基因表达。外泌体是一类由脂质双分子层膜组成的囊泡,包含一系列来自母细胞的成分,如miRNAs。现已有研究证实外泌体miRNA可作为生物标志物在肿瘤诊断和评估预后中的价值。目的:1.筛选出可作为胃癌早期检测的miRNA(miR-1246),进一步验证其作为胃癌早期诊断的生物标志物的可能性及价值。2.分析miR-1246产生与转移途径,探讨其与胃癌细胞的关系及作用机制。3、分析miR-1246作用的潜在靶蛋白、通路及蛋白的相互作用。方法:收集2017年10月~2018年9月新鲜血液样本165例和组织样本32对,血液样本中85例为胃癌患者、50例为健康对照组(Healthy control group,HC),30例为良性胃病患者(Benign gastric disease,BD),组织样本包括胃癌组织及癌旁正常组织(adjacent normal tissues,ANT)。分析基因表达综合数据库及血液样本,筛选胃癌中高表达的miRNA;通过透射电镜(Transmission electron microscopy,TEM)和Western blot验证胃癌患者血清外泌体,通过q RT-PCR检测外泌体miRNA-1246的表达水平。分析85例胃癌患者的临床资料(TNM分期、是否转移及肿瘤分化程度)与miR-1246表达的相关性;分析胃癌组织及癌旁组织中miR-1246的表达。培养胃癌细胞株,收集多个时间点外泌体,通过TEM和Western blot进行验证。采用RNA pull-down检测miR-1246运输到外泌体中的机制。利用DAVID、Cytoscape等软件对miR-1246进行生物信息学分析,寻找潜在的靶点和参与调控的信号通路。结果:综合分析两个GEO数据集我们发现胃癌患者外周血中有6个miRNA持续上调,数据分析显示miR-1246倍数变化最大的。q RT-PCR结果显示,血清外泌体miR-1246表达在GC中显著上调,与健康对照组比较两组差异有统计学意义(P<0.05)。此外,肿瘤切除后血清外泌体miR-1246表达显著下调,与术前组比较差异有统计学意义。与ANT相比,miR-1246在GC组织中的表达明显下调,差异有统计学意义。外泌体miR-1246表达在TNM I期胃癌患者与健康对照组间有显著差异,AUC值为0.843(P<0.001)。外泌体miR-1246在胃癌TNM I期组与良性病变组表达在有显著差异,AUC为0.811(P<0.001)。III-IV期患者外泌体miR-1246水平明显高于I-II期患者。85例胃癌患者根据外泌体miR-1246表达中位数将其分为高低两组,卡方检验显示,高表达的外泌体miR-1246与远处转移(P=0.035)显著相关。体外实验显示miR-1246在培养基中的表达随时间和细胞数量的增加而增加,通过GW4869处理AGS细胞后,外泌体miR-1246在培养基中的表达明显下调。miR-1246通过与ELAVL1结合转移到外泌体。GO富集分析显示,miR-1246的靶基因显著富集于细胞增殖的正调控、转录的正调控、基因表达的正调控、腭发育和凋亡过程的负调控。CC分析显示,大部分靶点位于细胞膜。根据MF分析结果,miR-1246的靶点主要和蛋白结合相关,包括转化生长因子β的结合和生长因子的结合等。KEGG信号通路富集分析发现miR-1246参与了多种信号通路,包括Hippo信号通路、Fox O信号通路、PI3K-Akt信号通路、Gn RH信号通路。结论:1.外周血中的外泌体miR-1246可作为一种潜在的胃癌早期诊断的生物标志物;2.血清中升高的miR-1246是在ELAVL1的帮助下,转运到外泌体中的;3.miR-1246的大部分靶点主要位于细胞膜上,参与多种信号通路调控。