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研究目的:
研究肿瘤细胞中Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶(cGMPdependentproteinkinaseⅡ,PKGⅡ)对MAPK通路(包括MAPK/JNK和MAPK/ERK通路)信号转导的抑制和相关生物学活动的影响。
研究方法:
(1)以编码PKGⅡ基因的腺病毒感染胃癌细胞株BGC-823使其高表达PKGⅡ,以8-pCPT-cGMP特异性激活PKGⅡ,通过Westernblotting、pulldown和CO-IP方法检测胃癌细胞MAPK/ERK通路中主要转导成分的活性。
(2)以编码PKGⅡ基因的腺病毒感染乳腺癌细胞MCF-7使其高表达PKGⅡ,以8-pCPT-cGMP特异性激活PKGⅡ,通过Westernblotting、pulldown和CO-IP方法检测乳腺癌细胞MAPK/JNK通路中主要转导成分的活性。
(3)通过[3H]脱氧胸苷摄入法检测PKGⅡ对MAPK/ERK相关的增殖活动的影响,用TUNEL法和吉姆萨染色方法检测PKGⅡ对MAPK/JNK相关的凋亡活动的影响。
研究结果:
(1)PKGⅡ抑制EGF诱导的胃癌细胞BGC-823的增殖。
(2)PKGⅡ对胃癌细胞BGC-823中由EGF引起的MAPK/ERK信号通路中Grb2与Sos1的结合、Ras蛋白活化、MEK1/2和Raf-1的磷酸化均有抑制作用,并阻断EGF引起的EGFR(Y1068)的磷酸化。
(3)EGF使乳腺癌细胞MCF-7凋亡减少,PKGⅡ对这一效应有拮抗作用。
(4)PKGⅡ对乳腺癌细胞MCF-7中由EGF引起MAPK/JNK通路中Grb2和Sos1结合、Ras蛋白的活化、MKK7(Ser271/Thr275)的磷酸化、JNK(Thr183/Tyr185)的磷酸化和c-Jun(Ser73)的磷酸化均有抑制作用,并抑制EGF引起的EGFR(Y1068)的磷酸化。
结论:
在癌细胞当中,PKGⅡ通过阻断EGFR的激活,进而抑制EGFR启动的MAPK信号通路的转导,最终抑制细胞的增殖并促进细胞的凋亡,发挥抗癌作用。