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牙齿的萌出依赖于牙囊的存在及牙槽骨的吸收,而其中单核细胞进入牙囊并在其中聚集是牙齿萌出的关键。牙齿萌出前,单核细胞迁入牙囊,并分化为破骨细胞吸收牙槽骨以形成牙齿的萌出通道。单核细胞趋化蛋白-1(monocytechemotactic protein-one,MCP-1)是单核细胞迁入牙囊的主要趋化分子,其基因表达的高峰期位于大鼠出生后第三天,与单核细胞迁入牙囊的时期相一致。表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)是发现最早的生长因子之一,分布于人体多种组织中,在上皮的生长、分化、创伤的愈合过程中作用显著。研究表明,将EGF注射到新生小鼠体内可以使切牙早熟性地萌出,因此EGF可能在牙齿萌出过程中发挥着重要的作用,但其具体的促萌机制尚不清楚。本实验拟在通过培养大鼠牙囊细胞,观察表皮生长因子对牙囊细胞体外增殖的影响,并研究其与单核细胞趋化蛋白-1的关系,探讨其在牙槽骨吸收过程中的作用,从而进一步探讨牙齿萌出的机理。方法:1.细胞培养:分离4～6天龄Wistar大鼠的牙囊组织,将组织块放入α-MEM培养基中培养,待细胞生长至汇合点后传代,取生长状态良好的3～4代细胞待用。2.检测EGF对细胞增殖活性的影响:将生长良好的牙囊细胞以2×10~4个/孔接种于96孔板中,培养24h后分别加入EGF(0.5、1、5、10、50ng/ml),与细胞共同孵育3～4天后,用MTT法对比观察不同浓度的EGF对牙囊细胞增殖活性的影响。3.检测EGF对MCP-1表达的影响:将生长良好的牙囊细胞接种于直径70mm的培养皿中,待细胞生长至汇合点后,用无血清的α-MEM培养液培养5h,再用10ng/ml浓度的EGF继续孵育0、0.5、1、3、6h后终止培养,Trizol一步法分别提取总RNA,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测同一浓度的EGF作用不同时间后,牙囊细胞MCP-1 mRNA的表达变化。结果:1.牙囊组织培养24h后便可见少数细胞从组织周围爬出,呈贴壁型生长,14～21天后细胞即可达单层汇合。细胞呈明显的多形性,主要有两种细胞形态,一种细胞呈梭形,另一种细胞呈多角形,两种细胞间杂在一起生长。免疫细胞化学染色显示细胞的波形蛋白表达阳性,角蛋白表达阴性,表明细胞源自间充质。2.合适浓度的EGF对牙囊细胞的增殖有明显的促进作用。在浓度为1ng/ml时开始显效,5ng/ml时增高,10ng/ml时达到最高,与对照组比较有显著差异(P＜0.01)。50ng/ml时增殖率开始降低,且与对照组无显著性差异(P＞0.05)。3.与10ng/ml EGF共同孵育0.5h,牙囊细胞中MCP-1mRNA表达开始升高(P＜0.05),3 h表达最高,与对照组相比有显著性差异(P＜0.01),以后逐渐恢复,但仍比对照组高(P＜0.05)。结论:EGF与其受体结合可作用于牙囊细胞,合适浓度的EGF能显著增加牙囊细胞的增殖活性。并且,EGF可通过上调牙囊细胞中MCP-1 mRNA的表达,促进单核细胞的聚集。