水稻早衰基因ES33的定位与功能分析

来源 :浙江师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:JK0803_zhoukaijun
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作物干物质产量的90%以上来源于光合作用。水稻作为重要的粮食作物,其叶片早衰直接影响光合作用和呼吸作用,严重影响产量和品质。通过研究早衰基因的功能,防止水稻过早衰老,实现对稻米品质和产量的改良,一直是科研工作者长期追求的目标。本文利用分子定位及基因重组技术挖掘新基因,了解衰老机制,为培育抗早衰水稻品种提供参考。本研究利用甲基磺酸乙酯(EMS,Ethyl methane sulfonate)化学诱变单季常规晚粳稻浙粳99,获得叶片早衰突变体es33(early senescence 33)。以野生型浙粳99为对照,对突变体进行农艺性状、光合性能、生理指标、叶绿体超微结构等鉴定,并对早衰基因ES33进行定位克隆和功能分析,以揭示es33突变体早衰的分子调控机制,主要结果如下:1.早衰突变体es33的表型性状:突变体es33幼苗在播种后第10天,第2叶和第3叶的叶尖出现干枯早衰现象;分蘖期叶片早衰明显,植株矮小、分蘖少;抽穗期叶尖干枯、抽穗延迟;成熟期植株衰老严重,株高、穗长、分蘖数、结实率、千粒重和粒宽显著降低,粒长没有明显差异。2.早衰突变体es33的光合色素含量、叶绿素荧光动力学参数:突变体es33叶片的光合色素含量、叶尖光系统Ⅱ电子传递速率、光转化效率降低,光损伤严重。3.早衰突变体es33的叶绿体超微结构和光合指标:观察苗期突变体es33叶绿体超微结构,与野生型相比,突变体es33叶绿体结构疏松、基粒数量减少,嗜锇颗粒数量增多;分蘖盛期突变体es33的净光合速率、气孔导度和蒸腾速率显著低于野生型,光合能力减弱。4.早衰突变体es33生理指标:突变体es33叶肉细胞过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)等酶活性降低,丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)和超氧阴离子(O2-)等有害物质含量升高。5.早衰基因ES33的定位克隆:遗传分析表明突变体es33早衰性状受一对隐性核基因控制;利用基因图位克隆和重测序技术,将控制该性状的基因定位在第3号染色体上的SSR标记STS-15和G24之间,物理距离977.8 kb,结合重测序和测序验证的方法确定LOC_Os03g31550为候选基因;ES33基因第11个外显子发生4个碱基的缺失,移码突变导致蛋白(黄嘌呤脱氢酶)翻译提前终止。6.早衰基因ES33的功能分析:系统发育树分析和氨基酸序列比对得知,ES33在山羊草、二穗短柄草、黍、狗尾草、高粱、小麦和玉米等禾本科作物中高度保守。基因ES33表达模式和蛋白亚细胞定位结果显示,根、茎、叶、穗、叶鞘各组织中,基因ES33在叶片中表达量最高,亚细胞定位显示ES33可能位于叶绿体。基因ES33的功能差异分析结果显示,ES33编码的黄嘌呤脱氢酶(XDH)在植物体内催化合成尿酸,测得突变体es33中尿酸含量明显低于野生型浙粳99,说明基因ES33突变造成酶活性受到影响,酶促反应产物含量降低,黄嘌呤脱氢酶合成受阻影响了水稻植株内尿酸含量的积累。本研究结果为深入探讨早衰基因ES33的功能及培育抗衰老新品种提供参考。
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