大肠杆菌是人和动物肠道内的正常菌群,但在一定的条件下可致人及动物发病,成为致病性大肠菌。近年来,大肠杆菌病呈明显上升趋势,己成为养殖业主要的细菌性疾病之一。喹诺酮类抗生素是应用最广泛的抗菌药物,在防治畜禽疾病中起着重要作用。随着其广泛的应用,耐药状况越来越严重。耐药大肠杆菌尤其是多重耐药菌株的出现和流行,以及耐药质粒的发现和耐药基因突变的增多,这些都使兽医工作者面临着巨大的挑战。因此,了解目前大肠杆菌的耐药性、耐药质粒携带和耐药基因的突变情况以及他们的变化趋势,对于指导合理用药以及控制和减缓细菌耐药性的增长、疾病的传播和病原微生物的扩散具有重要意义。　　 本研究对中国兽医药品监察所保存的20世纪90年代到2009年的动物源大肠杆菌进行复苏,按照考临床与试验标准协会(CLSI)所推荐的微量肉汤稀释法进行药物敏感性试验。根据其对喹诺酮类药物的最小抑菌浓度(MIC),选择出耐喹诺酮类药物的菌株,提取耐药菌株的DNA。同时根据GenBank中的基因序列,分别设计质粒和染色体介导的耐药基因的引物。用PCR检测质粒介导的5种耐药基因,比较各种耐药基因的阳性率,分析不同时期菌株的耐药性和耐药质粒携带情况。根据不同MIC范围,挑选不同耐药程度的菌株,对染色体介导的耐药基因进行测序,分析不同时期耐药菌株的耐药性和耐药基因变化情况,同时阐明细菌耐药表型与耐药基因的相互关系。　　 结果表明,不同时期的大肠杆菌对四环素均有较强的耐药性,而对多粘菌素E敏感。多重耐药现象严重,绝大多数菌株为4～10耐,2009年有2.21％的大肠杆菌对检测的13种药物全部耐药。大肠杆菌的耐药率与耐药重数随着时间的推移整体呈上升趋势。　　 877株耐喹诺酮类药物的动物源大肠杆菌检测到了 qnrA、qnrB、qnrS、aac(6)-Ib-cr和qepA这五种基因阳性质粒,它们的检出率分别为0.11%、0.34%、5.93%、11.74%和1.37%,以qnrS和aac(6)-Ib-cr这两种基因为主。不同时期这几种基因的检出率也呈逐渐增加的趋势,但也受不同采样地点的影响。　　 对挑取的156株耐喹诺酮类药物的动物源大肠杆菌的gyrA、gyrB、parC和parE基因QRDR分别进行比对分析,发现耐喹诺酮大肠杆菌的QRDR存在较为普遍的突变现象。常见的氨基酸位点的替代在本研究中基本上都得到了进一步证实,同时也发现了一些目前并未报道的单个和多个氨基酸位点的替代。在四种基因的突变中,gyrA的突变率最高,parC次之,parE、gyrB的突变率较低,它们的总突变率分别为87.82%、72.44%、16.67%、2.56%。不同时期这几种基因的突变率没有明显的规律。动物源大肠杆菌耐药基因的QRDR的突变率与这些菌株对喹诺酮类药物的耐药程度呈正相关。