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欧芹(Petroselinum crispum L.),又名洋芫荽和法国香菜等,属于伞形科欧芹属一二年生草本植物。作为香辛蔬菜,食用嫩叶,鲜根、茎汁可供药用。非生物胁迫,包括温度(高温、低温)、盐害和干旱等,是导致欧芹减产的重要因素之一。分离欧芹相关的抗性基因,筛选与抗性性状紧密连锁的分子标记,对于欧芹抗逆品种的选育有重要的意义。qRT-PCR是定量基因转录水平的主要方法之一,需要使用内参基因(Reference gene)校正目标基因的表达量。本实验克隆了欧芹相关内参基因的部分片段,使用qRT-PCR技术建立每个基因相对应实时荧光定量的方法,研究了不同逆境条件下内参基因表达的稳定性。同时,为进一步验证在本研究中确定的内参基因,还对pcDREB1基因在欧芹高温胁迫下的表达谱进行了研究。具体研究结果如下:(1)以欧芹叶片cDNA为模板,筛选了 8条内参基因(GAPDH、ACTIN、eIF-4α、SAND、UBC、TIP41、EF-1α和TUB)的中间片段。与其他物种的同源基因进行BLAST比对,结果显示碱基相似度均在80%以上。(2)利用qRT-PCR技术建立了上述8条基因相对应的实时定量方法。结果表明当10倍稀释cDNA为扩增模板时,标准曲线的敏感性和相关性较高,并且能在高通量范围内显示cDNA样品的起始量,为后续实验提供了较为准确的数据支持。(3)采用不同胁迫和激素处理的定量cDNA为模板,利用qRT-PCR技术,对筛选得到的8条内参基因通过geNorm、BestKeeper及NormFinder三个生物学软件计算进行稳定性分析。不同处理下,欧芹不同内参基因表现出不同的表达稳定性。结果表明,TUB和ACTIN在高温处理中显示相对最为稳定的表达水平;低温胁迫下eIF-4α和GAPDH均可应用于稳定性分析;干旱处理,EF-1α和ACTIN为最佳内参基因;干旱胁迫处理的最佳选择是EF-1α和GAPD;GA和ABA处理下均为EF-1α的表达稳定性最佳,MeJA和SA处理条件下ACTIN和EF-1α的表达稳定性最佳。