鼻咽癌中STGC3基因与mTOR通路相关蛋白质表达分析及意义

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目的:采用敲低STGC3基因表达的NP69细胞系,检测mTOR、pmTOR及下游效应分子S6、pS6、4E-BP1、p4E-BP1蛋白的表达水平,进一步验证mTOR相关蛋白分子在鼻咽癌细胞系及组织中的表达与意义,分析mTOR相关蛋白分子与STGC3间的关系,探明STGC3蛋白的相关分子网络,为阐明鼻咽癌发病分子机制提供新的实验依据。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)检测NP69、pRNAi-U6/Neo-scramble-NP69、pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、CNE1、CNE2细胞系,鼻咽癌组织及非鼻咽癌组织中mTOR信号通路相关分子mTOR、pmTOR、S6、pS6、4E-BP1及p4E-BP1的mRNA和蛋白表达情况;应用免疫组化SP法,检测上述蛋白质分子在鼻咽癌组织中的表达。结果:RT-PCR结果显示,pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、CNE1、CNE2细胞系和鼻咽癌组织中mTOR、S6的mRNA表达水平增高,;而4E-BP1mRNA表达降低,差异均有统计学意义(p<0.05)。NP69、pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、pRNAi-U6/Neo-scramble-NP69、CNE1、CNE2细胞系中mTOR mRNA的表达强度分别为0.371±0.047,0.806±0.036,0.352±0.026,0.838±0.041,0.805±0.025; S6mRNA的表达强度分别为0.881±0.055,1.340±0.057,0.843±0.041,1.405±0.089,1.351±0.073;4E-BP1mRNA的表达强度分别为0.451±0.035,0.250±0.024,0.457±0.030,0.275±0.025,0.302±0.039; mTOR、S6、4E-BP1在鼻咽癌组织中的mRNA表达强度分别为0.689±0.044,0.898±0.031,0.341±0.027,在非鼻咽癌组织中的表达强度分别为0.409±0.046,0.489±0.051,0.659±0.038。Western blot结果显示,pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、CNE1、CNE2细胞中mTOR、pmTOR、pS6、p4E-BP1蛋白表达水平增高,4EBP1蛋白的表达降低,差异均有统计学意义(p<0.05)。但S6在上述各细胞系中的表达无显著差异(p>0.05),NP69、pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、pRNAi-U6/Neo-scramble-NP69、CNE1、CNE2细胞系中mTOR蛋白的表达强度分别为0.487±0.037,0.719±0.054,0.606±0.049,0.819±0.036,0.905±0.049;pmTOR蛋白的表达强度分别为0.207±0.037,0.918±0.036,0.304±0.039,0.964±0.039,0.941±0.061;S6表达强度分别为0.863±0.038,0.888±0.043,0.798±0.049,0.901±0.043,0.909±0.048。pS6蛋白的表达强度分别为0.233±0.015,0.418±0.023,0.201±0.025,0.360±0.022,0.332±0.027;4E-BP1蛋白的表达强度分别为0.902±0.050,0.598±0.034,0.903±0.023,0.608±0.032,0.661±0.023;p4E-BP1蛋白的表达强度分别为0.291±0.014,0.454±0.022,0.277±0.025,0.484±0.019,0.510±0.026。鼻咽癌组织中mTOR、pmTOR、S6、pS6、p4E-BP1蛋白的表达增高,4E-BP1的表达降低。鼻咽癌组织中mTOR、pmTOR、S6、pS6、4E-BP1、p4E-BP1的蛋白表达强度分别为0.745±0.028,0.573±0.041,0.900±0.033,0.427±0.024,0.494±0.026,0.769±0.024;非鼻咽癌组织中的表达强度分别为0.531±0.037,0.423±0.017,0.606±0.027,0.213±0.023,0.920±0.025,0.435±0.026,差异均具有统计学意义(p<0.05)。免疫组化结果显示:mTOR、pmTOR、S6、pS6、4E-BP1、p4E-BP1蛋白主要表达于鼻咽癌细胞胞浆内,呈淡黄色至棕黄色。鼻咽癌组织中mTOR、pmTOR、S6、pS6、p4EBP1蛋白阳性表达率增高,4E-BP1蛋白阳性表达率降低,差异均有统计学意义(p<0.05)。鼻咽癌组织中mTOR、pmTOR、S6、pS6、4E-BP1、p4EBP1蛋白阳性表达率分别为83.33%(10/12)、75%(9/12)、66.66%(8/12)、83.33%(10/12)、33.33%(4/12)、91.66%(11/12),非鼻咽癌组织中阳性表达率分别为30.76%(4/13)、38.46%(5/13)、23.07%(3/13)、38.46%(5/13)、83.33%(10/13)、33.33%(4/13),差异均有统计学意义(p<0.05)。结论:1.敲低STGC3基因在NP69细胞的表达,NP69细胞中mTOR、pmTOR、pS6、p4E-BP1蛋白表达增高,4E-BP1蛋白表达降低,STGC3低表达可导致NP69细胞中mTOR通路的激活。2.鼻咽癌组织及细胞系中mTOR、pmTOR、S6、pS6、p4E-BP1蛋白高表达,4E-BP1蛋白低表达,存在mTOR通路激活。
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