论文部分内容阅读
盐碱、干旱等逆境条件一直是影响植物生长发育的重要限制因素，严重制约着我国的农业生产。大豆是重要的粮食作物，东北地区的主要作物之一。但是中国大豆的产量远不能满足市场的需求，所以培育转基因大豆，充分利用土地资源对于提高大豆产量具有十分重要的意义。近年来，大量的研究表明WRKY转录因子广泛参与了植物应对生物及非生物胁迫的反应过程。本研究通过农杆菌介导法将GsWRKY57B基因转入烟草和大豆，以研究该基因的生物学功能，改善大豆的生产情况，提高产量。主要研究结果如下：1.农杆菌介导的GsWRKY57B基因对烟草的遗传转化(1)构建了表达载体pBEOM-GsWRKY57B(2)筛选了烟草叶片再生和生根对草丁膦的抗性将叶片置于附加不同浓度的草丁膦诱导培养基及生根培养基中，确定烟草叶片的草丁膦筛选浓度为1.1mg/L。切下烟草分化成形的芽，放到不同浓度草丁膦的培养基中，确定烟草生根草丁膦筛选浓度为1.3mg/L。(3)烟草遗传转化以烟草叶片为外植体，农杆菌侵染5min，共培养3d，筛选时草丁膦浓度为1.1mg/L，同时培养基中添加500mg/L头孢霉素。待抗性芽长出后，切下芽转入到含草丁膦1.3mg/L的生根培养基中进行筛选培养。处理的60个外植体有53个外植体在筛选中可以分化出芽，一共获得85株烟草幼苗，筛选生根后产生37株植株，PCR检测后，有26棵抗性植株，统计分化产生抗性芽率为30.6%。2.转基因烟草表型分析讨论了转基因烟草叶片对于盐和干旱条件的耐受性均大于野生型；转基因烟草种子对于盐和干旱条件的耐受性均大于野生型。3.建立了农杆菌介导的大豆遗传转化体系大豆侵染关键时期所用的培养基，大豆发芽培养基：B5+0.5mg/L6-BA；pH：5.8。共培养阶段：1/10B5+3.9mg/L MES+1.67mg/L6-BA+40mg/L AS+0.25mg/L GA3+400mg/L L-cys；pH：5.4。筛选培养阶段：B5+0.59mg/L MES+1.67mg/L6-BA+500mg/L Cef+5mg/L PPT；pH：5.7。伸长阶段：B5+0.59mg/L MES+50mg/L Pyr+50mg/L Asp+0.5mg/L GA3+0.1mg/L IAA+1.0mg/L ZT+2.5mg/L PPT；pH：5.6。生根阶段：MS+2%蔗糖；pH：5.7。发芽4-5d的大豆，浸染30min，共培养3-5d。诱芽筛选草丁膦浓度为5mg/L，伸长培养时，草丁膦浓度为2.5mg/L。幼芽抽出3-5cm幼茎时切下放到IBA中1min，接到生根培养基中。处理的100个外植体，筛选后伸长产生1株植株，PCR检测后1株为阳性植株，统计转化率为1.0%。