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第一部分过表达LRIG3蛋白的胶质瘤细胞对血管内皮细胞生物学功能的影响的体外研究目的:探讨胶质瘤细胞在过表达LRIG3蛋白后,对血管内皮细胞迁移、微管结构形成、增殖能力的影响。方法:利用U87、U251胶质瘤细胞系,建立LRIG3蛋白稳定过表达组及空载体对照组。各组胶质瘤细胞LRIG3蛋白的过表达效率用Western blot进行验证。收集胶质瘤细胞培养基上清、制备相应的条件培养基。LRIG3蛋白过表达组和对照组的条件培养基分别作用于脐静脉内皮细胞,采用划痕愈合实验、Transwell小室迁移实验、MTT增殖实验、微管形成实验,分别检测不同条件培养基对脐静脉内皮细胞的迁移、增殖、微管结构形成能力的影响,分析胶质瘤细胞过表达LRIG3蛋白后,对血管内皮细胞生物学功能的影响。结果:LRIG3蛋白过表达组条件培养基,相对于对照组,使脐静脉内皮细胞的迁移、增殖、微管结构形成能力下降,差异均有统计学意义,p<0.05。结论:在体外研究中,胶质瘤细胞过表达LRIG3蛋白,具有抑制肿瘤细胞诱导血管生成的能力。第二部分胶质瘤细胞LRIG3蛋白表达下调对血管内皮细胞生物学功能的影响的体外研究目的:探讨胶质瘤细胞在LRIG3蛋白表达下调后,对血管内皮细胞迁移、微管结构形成、增殖能力的影响。方法:利用U87、U251胶质瘤细胞系,建立LRIG3蛋白表达敲低组及对照组。各组胶质瘤细胞LRIG3蛋白表达下调效率采用Western blot进行验证。收集各组培养基上清、制备条件培养基。LRIG3蛋白表达敲低组和对照组的条件培养基分别作用于脐静脉内皮细胞,采用划痕愈合实验、Transwell小室迁移实验、MTT增殖实验、微管形成实验,分别检测不同条件培养基对脐静脉内皮细胞的迁移、增殖、微管结构形成能力的影响。比较LRIG3蛋白敲低组和对照组条件培养基的作用差异,分析胶质瘤细胞在LRIG3蛋白表达下调后,对血管内皮细胞生物学功能的影响。结果:LRIG3蛋白表达敲低组条件培养基,相对于对照组,使脐静脉内皮细胞的迁移、增殖、微管结构形成能力增强,组间差异均有统计学意义,p<0.05。结论:在体外研究中,胶质瘤细胞LRIG3蛋白表达下调,增强了肿瘤细胞诱导血管生成的能力。第三部分胶质瘤细胞LRIG3蛋白表达水平对血管生成影响的在体实验研究目的:通过体内实验探讨胶质瘤细胞LRIG3蛋白表达水平对血管生成的影响。方法:利用已经构建的U87、U251细胞系的LRIG3蛋白过表达组、LRIG3蛋白敲低组和各自相应的对照组,建立BALB/cnu裸鼠皮内瘤模型、比较皮内瘤周围直接参与肿瘤供血的毛细血管数目,明确胶质瘤细胞在不同LRIG3蛋白表达水平下,对血管生成诱导能力的差异。利用LRIG3蛋白过表达的U87细胞系及相应对照组,构建裸鼠颅内原位肿瘤模型,磁共振检测颅内肿瘤生长情况,利用PET-CT检测各组对（13）NNH3·H2O的标准摄取值,评估LRIG3蛋白不同的表达水平对颅内原位肿瘤血流情况的影响。原位肿瘤进行免疫组化染色,分析肿瘤内微血管密度差异,进一步明确LRIG3蛋白对胶质瘤血管生成的影响。结果:在裸鼠皮内瘤实验中,与各自对照组相比,LRIG3蛋白敲低组的皮内瘤能诱导周围更多的微血管生成参与供血,而LRIG3蛋白过表达组的皮内瘤所诱导的瘤周微血管生成数目显著减少,各组间差异均有统计学意义,p<0.05。在裸鼠颅内原位肿瘤模型中,LRIG3蛋白过表达组的肿瘤对（13）NNH3·H2O的摄取、肿瘤内微血管密度均显著减少,差异有统计学意义,p<0.05。结论:在体实验研究中,胶质瘤细胞过表达LRIG3蛋白能够抑制胶质瘤血管生成。第四部分LRIG3蛋白影响胶质瘤血管生成的机制目的:探讨LRIG3蛋白影响胶质瘤血管生成的下游信号因子方法:利用构建的U87、U251细胞系的LRIG3蛋白过表达组、LRIG3蛋白表达敲低组和各自相应的对照组,通过qRT-PCR检测胶质瘤细胞中与血管生成密切相关的多种细胞因子（Ang1、Ang2、FGF、HGF、VEGFA、PDGFB等）的mRNA表达水平,Western Blot进一步验证相应蛋白表达水平变化,ELISA检测各组的条件培养基中相应因子的分泌水平,分析LRIG3蛋白影响胶质瘤血管生成的下游信号因子。结果:在U87、U251细胞系的LRIG3蛋白表达敲低组中,与对照组相比,VEGFA、Ang2、THPO、PDGFB的mRNA有不同程度的表达上调;结合LRIG3蛋白过表达组中各因子mRNA表达的检测结果,仅有VEGFA mRNA的表达水平出现相应下调,而其他细胞因子的表达变化无显著统计学差异。Western Blot检测到各组胶质瘤细胞中VEGFA的蛋白表达变化和mRNA表达变化有相同的趋势,ELISA也证实各组的条件培养基中VEGFA的分泌水平有一致的变化。结论:LRIG3蛋白通过抑制胶质瘤细胞VEGFA表达影响胶质瘤血管生成。第五部分LRIG3蛋白调节胶质瘤细胞VEGFA表达的分子机制目的:既往研究表明胶质瘤中LRIG3蛋白表达水平和PI3K/AKT通路、ERK通路激活水平有相关性,而PI3K/AKT通路、ERK通路同时也是VEGFA表达调控的重要信号通路。在这部分研究中,我们拟探讨PI3K/AKT通路、ERK通路在LRIG3调节VEGFA表达中的作用,明确LRIG3蛋白影响胶质瘤细胞VEGFA表达的分子机制。方法:在LRIG3蛋白表达敲低的U87、U251细胞系和相应对照组中,使用对应通路的特异性抑制剂（PI3K/AKT通路抑制剂LY292002、ERK通路抑制剂PD98059）,并获取相应的条件培养基。Western Blot检测胶质瘤细胞中VEGFA蛋白水平的表达变化,ELISA检测VEGFA在条件培养基中的分泌水平,并检测各组条件培养基对脐静脉内皮细胞的迁移、增殖、微管结构形成能力的影响。在胶质瘤组织样本中,通过Western Blot和免疫组化,分析LRIG3表达水平和PI3K/AKT通路、ERK通路中AKT、ERK磷酸化水平、VEGFA表达水平的相关性。结果:在U87、U251细胞系的LRIG3蛋白表达敲低组中,使用PI3K/AKT通路特异性抑制剂LY292002后,与对照组相比,胶质瘤细胞表达VEGFA mRNA、蛋白的水平和分泌到条件培养基中的VEGFA蛋白水平均有显著下降,差异有统计学意义,p<0.05。使用ERK通路特异性抑制剂PD98059后,对VEGFA的各项检测结果没有显著影响。血管内皮细胞功能实验结果证实,只有使用PI3K/AKT通路的特异性抑制剂LY292002,才能抑制LRIG3蛋白表达敲低的胶质瘤细胞对血管生成的促进作用。胶质瘤手术切除标本提取蛋白的Western Blot和组织免疫组化研究结果表明,LRIG3表达水平和AKT磷酸化水平、VEGFA表达水平负性相关。结论:LRIG3蛋白通过抑制胶质瘤细胞中PI3K/AKT通路来抑制VEGFA表达