基于巨噬细胞极化探讨黄芪当归提取物对肺纤维化的影响

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目的通过文献研究证明肺纤维化与肺痿的相关性,以及黄芪当归提取物对肺纤维化的治疗作用;通过实验研究黄芪当归提取物治疗肺纤维化的最优配方对巨噬细胞极化的影响,以探究最优配方对肺纤维化的治疗机制是否和巨噬细胞表型有关,为治疗肺纤维化提供新靶点。方法文献研究:根据中医古籍与知网上近年来相关文献,探求肺纤维化与肺痿之间的关系;联系《黄帝内经》相关原文与后世医家的相关阐述,探讨肺痿与督脉、带脉、冲脉三者之间的关系,为肺痿的治疗提供新方向。实验一:选用雄性ICR小鼠105只,SPF级,随机分为7组,每组15只,分别为正常组、模型组、五个优化配方治疗组,即优化配方a、b、c、d、e五个组。于气管环状软骨之间向心端注入注射博莱霉素,复制小鼠肺纤维化模型,在造模后第21天取肺,右肺下叶用于HE染色和苯胺蓝染色;左肺用于碱水解法检测羟脯氨酸(HYP)的含量,以验证最优配方。实验二:选用60只SPF级ICR雄性小鼠,随机分为4组,用与实验一相同方法造模,造模后第21天取肺泡灌洗液用于流式细胞仪,检测不同巨噬细胞的数量。实验三:制备最优配方含药血清,作用于RAW264.7细胞,设置对照组,并加LPS给予刺激,用于流式细胞仪,检测不同巨噬细胞的数量。实验四:与实验三相同的方法培养细胞,RT-PCR检测与巨噬细胞表型相关基因的表达含量。结果文献研究:肺纤维化可归属于中医“肺痿”的概念;经探讨可以证明肺痿与督脉、带脉、冲脉三者有着非常紧密的联系,三者可通过对阳明气血的调节来影响肺痿的发生发展。实验一:从切片染色来看,模型组的病理表现为肺纤维化程度严重,五个中药治疗组都有一定程度减轻,优化配方a治疗效果最好;与模型组相比,五个中药治疗组羟脯氨酸的含量都下降,配方a最为显著,有统计学意义。实验二:与正常组相比,模型组的M1型巨噬细胞数量下降,M2数量上升;与模型组组相比,治疗组M1数量上升,M2数量下降,M1差异有统计学意义。实验三:对照组与含药组相比,含药组M1型巨噬细胞升高,M2型巨噬细胞的数量降低,差异具有统计学意义;对照+LPS组与含药+LPS组相比,后者的M1型巨噬细胞数量升高,M2型巨噬细胞数量降低,差异有统计学意义。实验四:对照组和含药组相比,含药组的IRF5、IL-12和NF-κB p65的基因表达量都有所提高,IRF5和IL-12差异显著,都有统计学意义;IRF4、IL-10和NF-κB p50的基因表达量都有所下降,IRF4和IL-10差异显著,都有统计学意义。结论黄芪当归提取物可以有效减轻肺纤维化程度,其作用机理可能和促进巨噬细胞向M1分化,抑制向M2分化有关。
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