在多数动物中,生殖细胞命运的决定和维持依赖于母系遗传的物质-生殖质（germ plasm）。生殖质在结构和功能上与雌性生殖细胞特异性细胞器-巴氏小体（Bb）相关联。Bb是一种核蛋白复合物,含有RNA及结合蛋白,如buc、dazl和mitf等,通过参与RNA代谢,从而控制卵子发生和生殖细胞发育。在斑马鱼中bucky ball（buc）基因是生殖质形成的关键调节因子,在生殖质的特化和发展过程中发挥了至关重要的作用。先前的研究表明:Buc蛋白能够富集buc基因和其他基因的RNA结合蛋白,富集来的buc基因的RNA翻译成蛋白并启动正反馈调控机制,从而促进卵母细胞极性发育和生殖细胞的分化。buc基因在在卵母细胞的发育过程中发挥着不可或缺的作用。在斑马鱼中,buc基因被认为是通过Bb诱导原始生殖细胞（Primordial germ cells,PGCs）增加。buc基因m RNA过表达会导致PGCs数量增加并且产生异位PGCs。PGCs是生殖细胞的祖细胞,能够产生卵子和精子,为生殖和发育提供了基础。在斑马鱼、青鳉等多种鱼类的研究表明,PGCs的数量对性别决定和性别分化有影响。PGCs的形成、增殖、迁移、以及分化是由几种母源性的生殖质所决定的,包括dazl、dnd、nanos、piwi和vasa等。Buc蛋白是一种高度保守的生殖质组分,在PGCs发育过程中起着重要作用。因此,buc基因的研究对探究母源性的生殖质及PGCs的发育提供了依据,对生殖发育理论、生殖质资源保护和育种应用具有重要的意义。实验采用了模式生物-青鳉（Oryzias latipes）,一种具有代表性的小型淡水鱼,因其个体小、繁殖速度快、胚胎透明、基因组小等优点,常被用来进行细胞生物学和发育生物学研究。目前,我们实验室拥有vasa-GFP、nanos-GFP等多种生殖细胞特异标记的转基因品系,基因敲除技术也已在青鳉中成功应用。此外,实验室长期致力于青鳉性腺基因对种系发育和性别调控的探索和验证,诸如青鳉piwi或vasa基因影响PGCs迁移,dazl或dnd基因的功能缺失导致了PGCs缺失,oct4和nanog基因影响胚胎干细胞的发育。在此基础上,以青鳉为载体研究buc基因在性别发生和性腺发育中的作用。本研究通过RACEs（Rapid-Amplification of cDNA Ends）克隆得到青鳉buc基因的全长c DNA序列,通过RT-PCR、化学原位杂交和荧光双色原位杂交分析了该基因在胚胎以及性腺中的表达模式。将青鳉鱼buc基因的3’UTR融合红色荧光蛋白（RFP）构建成rfp-buc 3’UTR表达载体,利用RNA定点表达技术探究了buc 3’UTR标记PGCs的功能及其保守性。通过青鳉鱼buc基因的反义RNA（ASbuc m RNA）敲降和青鳉鱼buc基因的正义RNA（Olbuc m RNA）过表达的方法,探索青鳉buc基因对于PGCs特化的影响。本研究在青鳉中发现了一个buc同源物（Olbuc）,并进一步阐明了Olbuc在青鳉PGCs中的作用。Olbuc全长2148bp,编码574个氨基酸（包括终止密码子）包含1724 bp CDS（Coding Sequence）、167 bp 5’UTR（Untranslated Region）和257 bp 3’UTR。通过RT-PCR检测发现,在胚胎发生过程中,Olbuc基因在成年雌性卵巢中特异性表达。通过原位杂交发现,在减数分裂期的卵母细胞中含有丰富的Olbuc RNA,但在卵子发生的过程中表达量逐渐减少。在青鳉鱼中,Olbuc并没有与Bb的标记基因dazl共定位。有趣的是,Olbuc 3’UTR可以诱导PGCs中RFP报告基因的特异性和稳定性表达。此外,在青鳉胚胎中过表达Olbuc m RNA可以增加PGCs数目并产生异位PGCs。综上所述,可以看出Olbuc在青鳉中不依赖于Bb作用调控的PGCs发育。为进一步的研究青鳉生殖发育奠定了基础。